购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?

大多是因为在冻存以及复苏的时候，DMSO对细胞产生了毒性，导致细胞死亡，或者是低温导致细胞内液结冰产生冰晶损伤，建议使用全血清和DMSO作为冻存液，并且“慢冻快复”。而且刚复苏时离心转速可以高一些

解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。

大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。但对于DMSO敏感的细胞，还是复苏细胞时，用离心去除DMSO比较好。