如何构建PB转座子介导的外源基因在哺乳动物细胞系中能够稳定表达的载体？哪些文献可以参考并列举？

设计引物pcr后，将目的片段通过酶切连接或者同源重组连接到载体上，然后转染细胞后进行药筛即可。

可以参考这一篇文章

piggyBac转座子介导HepG2细胞不同亚型药物代谢酶稳定共表达方法比较

Comparison of methods for stable co-expression of different subtype drug-matabolizing enzymes in HepG2 cells by piggyBac transposon

可以按照以下步骤进行：

1. 选择合适的PB转座子：根据研究需要选择合适的PB转座子，如piggyBac转座子。

2. 获得PB转座子载体：将PB转座子的DNA序列克隆到适当的载体中，如质粒载体。

3. 构建外源基因的表达载体：将需要稳定表达的外源基因的DNA序列克隆到PB转座子载体中，通常在外源基因的5'端添加启动子和5'非翻译区域，以及在3'端添加终止子和3'非翻译区域。

4. 验证载体的正确性：通过测序等方法验证构建的载体是否正确。

5. 转染哺乳动物细胞系：将构建好的PB转座子载体转染到目标哺乳动物细胞系中，可以使用适当的转染试剂或方法，如磷酸钙共沉淀法、电穿孔法等。

6. 选择稳定表达细胞株：使用适当的筛选方法，如添加适当的抗生素或选择性培养基，筛选出稳定表达外源基因的细胞株。

7. 验证外源基因的稳定表达：通过Western blot、荧光显微镜观察等方法，验证稳定表达细胞株中外源基因的表达情况。

参考文献：

Ding, S., Wu, X., Li, G., Han, M., Zhuang, Y., & Xu, T. (2005). Efficient transposition of the piggyBac (PB) transposon in mammalian cells and mice. Cell, 122(3), 473-483.

一类是整合型，这类载体的代表是pSV。另一类为游离型。