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        基因过表达构建实验

        实验分类:

        其他实验

        最新修订时间:

        简介

        过表达载体是将目的基因 CDS 编码区构建到相应的质粒或者病毒载体中,从而在宿主细胞中高效表达大量目的蛋白的质粒载体。过表达载体有多种构建方法,这里介绍一种常见方法——同源重组法。

        原理

        使用两端带限制性内切酶位点的 PCR 引物扩增目标 DNA 片段,同时用对应限制性内切酶切割质粒载体,再使用同源重组酶连接载体与扩增后的 DNA 片段。

        应用

        基因功能研究、大量目的蛋白制备。

        来源:

        操作方法

        🔥 过表达载体的构建

        过表达载体是将目的基因 CDS 编码区构建到相应的质粒或者病毒载体中,从而在宿主细胞中高效表达大量目的蛋白的质粒载体。过表达载体有多种构建方法,这里介绍一种常见方法——同源重组法。

        过表达细胞株的构建

        过表达细胞株的构建指的是通过生物、化学、物理等细胞转染手段将某个特定基因的表达水平保持稳定的提高,从而实现在该细胞系中特定基因或蛋白功能增强。基因过表达作为一种传统的分子生物学技术,被认为是研究基因功能的实验策略之一,至今依然在生物学研究中发挥着重要作用。

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