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问
Fluo4 AM检测细胞质内钙离子浓度,钙离子探针荧光微弱?
dxywode
Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液,浓度为2mM。用于细胞内钙离子检测时,Fluo-4 AM的常用浓度为0.5-5 μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育10-60分钟进行荧光探针装载,随后适当洗涤,洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内充分转变成
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问
怎样提高免疫发光实验的效率?
wuli猫宁
一、细胞密度1、保证玻片上的细胞以单层细胞生长2、细胞生长速度3、保证爬片是无菌的二、孵育抗体1、一抗浓度过高;2、一抗孵育之后洗涤不充分;3、一抗特异性不高,这时候你要考虑这个蛋白是细胞本身就表达的还是转入的质粒表达的; 4、可以查一下抗体识别序列,看看是否有同源性的蛋白。三、DAPI复染细胞核四、封片
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问
肺癌切片免疫组化的结果如何判读
dxy_gwrp7ndq
主要依靠其免疫组化作为重要的诊断依据,TTF-1、 NapsinA、CK7阳性,提示是肺腺癌。P40、P63、CK14阳性,提示是肺鳞状细胞癌。CgA、Syn、CD56阳性,提示是肺的神经内分泌肿瘤。上述所有的神经内分泌标记、腺癌的标记和鳞癌的标记都是阴性,则提示是肺的大细胞癌。判断免疫组化染色为弥漫强阳性的标准为,大于等于10%的肿瘤细胞阳性,信号定位准确,且被染成黄色或褐色颗粒。局灶阳性或弱阳
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问
人肿瘤抗原的识别需要注意什么?
dxy_gwrp7ndq
收集细胞要迅速 ,低温下进行,以减弱蛋白酶的作用
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问
做间接法荧光免疫染色,如何设置对照?
府宅
(1)空白对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化,这个对照必须有,目的是看自发荧光,脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。(2)阴性对照:标本直接滴加二抗,呈阴性反应。(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清,以PBS冲洗后,在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体,应呈阴性反应。
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问
为什么预选实验跟实际有差距
迟C迟
这个同学,你首先得了解预实验,预实验不等于正式实验,一切结果以正式实验为准。如果实验不可重复,除了考虑操作原因,可能也得考虑课题设计初衷。
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问
请问细胞固定时需要注意什么?
dxy_8iaq585q
注意固定的时间要合适: 与材料的大小和温度有关:材料大则时间长,材料小则时间短;温度高则时间短,温度低则时间长。
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问
免疫组化标本保存用生理盐水还是甲醛?
迟C迟
甲醛和生理盐水都可以。如必须保存时,则应保持置4℃以下保存。 一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存1个月以上。
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问
EMSA反应后条带弥散
whilt-shirt
检查探针上是不是有很多蛋白的BINDING SITE ?尝试减少曝光时间,EMSA 要在正常实验前要试一下不同BUFFER,高盐低盐等对结果的影响,建议从头摸索一下实验条件。另外考虑是不是跟胶聚合有关系。配胶的试剂是否新鲜,聚合是否充分。核酸电泳的时候,胶不好跑出来有时就会拖拖拉拉的。
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问
蛋白浓度较低,如何提高上样量
whilt-shirt
选用10孔的梳子,增加上样体积,提高总蛋白量
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问
大分子量蛋白(470kDa)如何快速转膜?
staywalking
Tris- Acetate gel电泳,低浓度甲醇冰水浴湿转。欲速则不达。
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问
免疫组化两步法和三步法有什么优缺点呀?
dxy_gwrp7ndq
三步法是一般是最常用的免疫组化方法,敏感度高高的,操作上面也十分简便。如果组织内源性生物素过高,就容易造成了假阳性显色。内源性生物素在肝,肾组织中的含量尤其多,在脾、胰、脑、乳腺、子宫内膜和骨骼肌等组织中也广泛存在,因此,避开内源性生物素的感染,才最为关键。二步法利用多聚HRP代替了Bioten,这一招移花接木,从技术上克服了组织内源性生物素造成的非特异性的背景染色。二步法在避免了生物素干扰的同时
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问
培养已经有耐药性的金黄色葡萄球菌时,有必要添加抗生素来保持其耐药性吗?添加抗生素的时间、添加在哪里在什么时候比较合适呢?
彭彭彭文
当然必须使用,在培养时,加入实验中培养基
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问
耐药细菌如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌在培养过程中,是在那一步加入抗生素来保证细菌的耐药性的呢?是在保存液中加入还是液体培养基中?
迟C迟
细胞培养时就要在培养基中加入抗生素了。保存的时候可以直接吸取含抗生素的培养液加甘油保存。
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问
为什么冰冻切片不可以用甲醛固定
dxy_gwrp7ndq
如果用多聚甲醛或者是甲醛进行固定的话,组织速冻的过程中会产生冰晶,不利于组织的切片,并且影响片子的质量
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问
提取DNA前处理有磁珠,一般会是哪里的原因?
丁香粉猪猪
可能跟磁珠的词性跟或者磁吸的时间有关
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问
预实验和正式实验结果差别很大
迟C迟
考虑两次实验有什么样品、操作、实验试剂差异。控制环境变量之后,建议提高样本量重新做,没办法,做实验就这样。
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问
免疫荧光为什么单标红色出来的是粉红色
丁香粉猪猪
标本固体色调制不对,可能显微镜或者固体液不对,调试一下
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问
ELISA实验如何尽量避免假阴性和假阳性?
dxy_gwrp7ndq
引起 ELISA 测定错误结果的原因主要有:①标本因素(类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等干扰)②试剂因素(标本管中添加物质的影响)③操作因素(标本溶血、标本受细菌污染、标本凝集不全、标本保存不当)
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问
如何提高标记准确率?
迟C迟
请问是什么实验?在医学研究领域,生物标志物的研究思路,一般分为三个阶段:标志物的筛选(Discovery),标志物的验证(Verification)和标志物的确认(Validation)。标志物的筛选通常需要借助高通量的组学手段,对大规模临床样本进行代谢组学或蛋白组学测定,筛选到具有统计学意义的差异代谢物或蛋白,经过一系列复杂的生物信息学分析,筛选出目标生物标志物。接下来的验证阶段,需要对更小范围
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