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质粒是PET28和PET32,感受态是BL21,做了17°,220r,12h,IPTG浓度0.5mM/L,诱导的和不诱导的条带一样,有什么吗?办法优化吗?
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有针对蛋白抗体的话可以先 WB 压一下;还可以调整诱导温度(比如25°C、30°C)、IPTG 浓度(0.5 有点高)。我们一般做表达小试,会考虑 16°C/25°C/30°C/37°C + 0.1/0.2/0.3/0.5/1 IPTG + 8/12/18 h 诱导时间,多个条件调试出最佳表达条件,实在不表达就需要考虑换载体/系统了。
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