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- 2026年01月09日
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原核表达纯化，真核表达纯化，天然蛋白纯化，包涵体复性，蛋白鉴定
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武汉华美
我公司拥有大肠杆菌重组蛋白、毕赤酵母重组蛋白、天然蛋白三大技术服务平台，在重组蛋白表达、纯化、包涵体复性、天然蛋白提取方面拥有完备先进的设备、丰富的经验。现已通过原核和真核表达系统、以及表达载体的优选，结合众多纯化方式获得了数十个种属的上千种高质量的重组蛋白，提取天然蛋白百余种。我们生产的众多蛋白已成功应用于蛋白结构研究、细胞功能试验、免疫检测试剂、重组蛋白药物、诊断试剂开发等众多领域，深受全世界顾客的好评。
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文献和实验【原创】真核表达His蛋白，进行天然构象蛋白纯化的心得和疑问。
由于要做酶活性实验，所以选择真核表达His标签蛋白进行非变形的纯化。（避免了原核表达可能得到没功能的蛋白。）先上图上真相：这个说明了：细胞超声裂解后，离心沉淀的碎片里含少量His标签的过表达目的蛋白（第一道），上清里含大量His蛋白（第二道）。之后用特殊的含有镍的树脂小球纯化His蛋白，由于裂解液体积太大了，就分了两次加到柱子里。第一次加进去之后4度孵育1h，然后弃流出液（第三道），第二次把剩下的裂解液加进去，同样4度孵育1h后弃流出液（第四道）然后用漂洗液洗2次柱子里的树脂，使得非特异性黏着
原核表达蛋白纯化② 真核表达蛋白抽提2. 体系孵育与 pull-down3. 考染检测与 WB 验证四、GST pull-down 结果1. GST pull-down 结果分析① 考马斯亮蓝检测② Western blot 验证五、GST pull-down 拓展1. GST pull-down 与 Co-IP 区别① GST pull-down② Co-IPGST pull-down 与 Co-IP 区别：GST pull-down 是原核纯化蛋白与真核蛋白在试管内发生生化反应互作的结果
改进，提出了包括折叠漏斗和聚集漏斗的双折叠漏斗模型（Clark,2004）。基于该模型可知在大多数蛋白质的折叠过程中，与正确折叠相竞争的还有错误折叠和聚集沉淀，聚集态蛋白质具有与天然态相似的低自由能，处于聚集漏斗的底部，一旦形成将难以恢复天然活性态。 包涵体蛋白的复性 包涵体蛋白的复性步骤主要包括裂解、洗涤、溶解、复性。 裂解 大肠杆菌经发酵后，表达的外源蛋白多以稳定的包涵体形式存在于细胞质中，将其提取出来方法多采用超声破碎法，而由于超声处理量的限制，生产工艺一般采用高压均浆破碎，破碎后大肠
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