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        原核表达,加不加IPTG都能表达

        相关实验:🔥 蛋白质的原核表达

        user-title

        dxy_xjnju8o

        我用的质粒是pET28a,目标条带大概在40~55KDa处,加入IPTG的量最初是0.5mM,使用的宿主菌是BL21(DE3)。菌液摇到OD600=0.6-0.8左右时加入IPTG,在37℃时诱导4小时,在低温诱导时(16℃)诱导过夜,但无论何种条件何种培养方式,加IPTG诱导和不加IPTG诱导有目标条带出现在胶图上,Western Blot结果也是如此,且没有任何差异;现在换了宿主菌Rossetta-gami 2(DE3) plysS,SDS-PAGE结果无论诱导与否直接没有结果。理论上来说不加IPTG是不会有结果的,所以想请教各位大佬能不能指条明路。

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        1 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        在您进行原核表达时,有一些可能的原因导致您无论是否添加IPTG都能观察到目标蛋白条带的出现:

        1. 自发性诱导:有些表达载体或宿主菌株在特定条件下可以自发表达目标蛋白,而不需要外源性诱导剂如IPTG。这可能是导致您观察到目标蛋白条带的原因之一。这种自发性表达可能是由于一些突变或其他因素导致的。

        2. 泄漏表达:宿主菌中的T7 RNA聚合酶可能存在泄漏表达的现象,即在未添加IPTG的情况下,T7 RNA聚合酶仍能以较低水平转录目标基因。这可能导致您观察到目标蛋白条带的出现。

        3. 载体变异:在特定的质粒构建中,存在一些变异或异常情况,使得目标基因在不添加IPTG的情况下也能表达。这可能是由于质粒构建时的误差或突变导致的。

        4. 宿主菌株问题:您使用的宿主菌株可能存在一些特殊性质,导致即使不加IPTG也能表达目标蛋白。

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