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        构建pre-miRNA过表达载体问题

        相关实验:双荧光素酶报告实验

        user-title

        dxy_1pjfe3f

        麻烦大家啦,请问验证植物mirna与把基因互作的双荧光素酶实验中,pre-mirna用的载体是哪个?,靶基因用LUC和pmirG有什么区别嘛?求大佬赐教!!!

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        4 个回答

        user-title

        高山云初

        有帮助

        萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶基因,基因用LUC和pmirG没有什么区别。

        user-title

        dxy_mqg1dtg8

        有帮助

        一般常用的pre-miRNA过表达载体包括pCAMBIA系列载体、pBI121等,其中pCAMBIA系列载体是比较常用的。

        在双荧光素酶实验中,靶基因可以使用LUC或pmirG作为报告基因进行检测。LUC是firefly luciferase的缩写,pmirG是一种基于荧光素酶的双荧光素酶报告基因。二者的区别在于LUC是一种蛋白质,而pmirG是一种RNA,通过将miRNA与pmirG靶点的3'UTR序列相结合,可以检测miRNA与靶基因间的相互作用。

         

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        一般用含有H1或者U6启动子的载体。

        user-title

        沫子大大

        有帮助

        常见的miRNA合成载体有pRS300和pRS400等。这些载体通常包含miRNA的前体序列,在细胞内会被加工成成熟的miRNA。

         

        至于靶基因,LUC和pmirG是两种常用的报告基因。LUC是来自火萤酶(Luciferase)的基因,它可以产生可见光的荧光信号。pmirG则是一种含有荧光蛋白基因(如GFP或RFP)的报告基因载体,用于检测基因的表达情况。

         

        LUC和pmirG在实验中的区别在于报告基因的选择。LUC报告基因可以通过测量荧光信号的强度来定量分析靶基因的表达水平。而pmirG载体则通过可见光观察荧光蛋白的表达情况,从而间接评估靶基因的表达。

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