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双荧光素酶报告实验
实验分类：
蛋白质实验
最新修订时间：
简介
将目的基因转录调控原件构建到萤火虫荧光素酶报告基因质粒上，与海肾荧光素酶内参基因质粒共转染细胞，裂解细胞后分别加入荧光素酶底物，会发出生物荧光，从而被荧光测定仪读取。
计算萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶的相对比值，可以判断对目的基因转录调控原件的影响。
来源：
操作方法
（1） 质粒构建和转染：构建带有目的序列的萤火虫荧光素酶报告基因，与海肾荧光素酶内参基因质粒共转染细胞，24 h 后可收获样品。（2） 裂解：细胞用 PBS 润洗两次后，加入适量细胞裂解液（原液为 5X，用双蒸水稀释至 1X；参考体积：24 孔板每孔加入 100~150 μL，也可按下表适量加入裂解液），反复吹吸细胞，并于摇床震荡裂解 15 min，收集细胞至 1.5 mL EP 管中， 4 ℃
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