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50T
- 英文名:
Double-Luciferase Reporter Assay Kit
- 保质期:
参照shuomingshu
- 供应商:
武汉金开瑞生物工程有限公司
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参照shuomingshu
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实验原理
萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(Renila luciferase)可分别催化荧光素(luciferin)或腔肠素 (coelenterazine)氧化形成oxyluciferin或coelenteramide,并在此过程中产生生物荧光。Double-Luciferase Reporter Assay Kit⾸先以荧光素为底物检测萤火虫荧光素酶报告基因的活性,之后在淬灭该荧光反应的同时,以腔肠素为底物检测海肾荧光素酶报告基因的活性,具有检测迅速、灵敏度⾼、检测范围⼴、⽆细胞内源活性干扰等特点。
试剂盒组分(50T/100T)、操作步骤等更多细节请查看zuixinban说明书
常见问题
- Luciferase Reaction Buffer Ⅱ在溶解过程中可能有部分沉淀析出,使⽤前应充分需荡或将其置于37℃⽔浴锅中,保证其完全溶解后再使⽤。
- Luciferase Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent Ⅱ反应前需平衡⾄室温。
- 为保证实验数据准确可靠,建议测量⼤量样品时使⽤排枪添加Luciferase Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent Ⅱ,使⽤过程中务必留意排枪各孔吸取的液体是否⼀致。
- Luciferase Reaction Reagent和Luciferase Reaction Reagent Ⅱ均易发⽣氧化反应,请合理安排实验,避免样品解冻后在室 温下⻓时间放置。

金开瑞-提供核酸和蛋白的整体研究方案:
武汉金开瑞生物工程有限公司是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。金开瑞极其注重平台技术提升,现已有多项自主知识产权和软件著作权专利,并已通过ISO9001质量管理体系认证,2018获批“千企万人”支持计划。公司以“细胞外囊泡”研究中心、基础生物医学实验中心、蛋白抗体中心和分子生物学中心为依托,提供核酸和蛋白的整体研究方案,与众多科研单位携手开展了大量的探索项目。截止到目前,已支持客户发表科研论文达1000+篇,累计影响因子6000+。
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文献和实验Double-Luciferase Reporter Assay Kit
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利。因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品
【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题?
lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒,但是我不知道两种质粒间的比例是多少,有哪位前辈做过这方面实验的,请帮我指点一下,谢谢了 xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL-TK(海蜃素荧光素酶)的荧光值要高一些,我转20ng/孔(24孔板),作为内参.pGL3(萤火虫荧光素酶)的荧光值低一些,我转0.4ug/孔(24孔板)然后0.4ug的调整质粒。这样的话,萤火虫荧光素酶
a)萤火虫荧光素酶建议选取pGL-3或pGL-4的载体或自己构建相应的载体; b)海肾荧光素酶建议选取phRL-TK或pGL-4代载体或自己构建相应的载体。建议海肾载体不使用强启动子(如SV40、CMV),而选用中等强度的启动子(如TK)。 4.双荧光素酶报告基因的载体比例:根据实验具体情况调整。建议作一个预实验来调整(萤火虫载体与海肾载体比例分别用1:10、1:20、1:50、1:100),萤火虫荧光素酶检测发光值大于海肾荧
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