异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG），367-93-1，

异丙基-1-硫代β-D吡喃（型）半乳糖 isop-ropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside

　　异丙基 -1-硫代β -D吡喃（型）半乳糖 isop-ropyl-1-thio-β -D-galactopyranoside 为 isopropyl-1-thio-β -D-galactopyranoside的缩写。是诱导大肠杆菌乳糖操纵子酶合成的强力诱导物。在培养基中加入该物 10-4 克分子时，即可通过存在于大肠杆菌细胞膜中的微量半乳糖苷渗透酶而被参入至细菌体内。通常诱导物质即根据这种通过操纵子的作用制造的β -半乳糖糖苷酶而被利用于代谢的。但 IPTG等不能

感受态细胞常用的制备方法

性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制－修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。 α-互补现象：因为许多载体都带有一个LacZ基因的调控序列和头146个氨基酸的编码信息，编码α-互补肽，该肽段能与宿主编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补（α-互补）。当这种载体转入可编码?－半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞中时，在异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下，宿主可同时合成这两种肽段，虽然它们各自都没有酶活性，但它们可以融为一体形成具有酶活性的蛋白质。所以称这种现象为α-互补

GST－融合蛋白的表达与纯化

原理 GST 纯化系统是利用GST （glutathione-S-transferase ）融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷） 2g IPTG 溶解入10ml 水，过滤除菌，分装，-20℃保存。u Lysis buffer （50ml）1)2.5ml 1 M Tris，pH8.0 2)0.1ml 0.5ml EDTA 3)0.292