诱导表达不出蛋白

我用0.1、0.5、1、2、4mM的IPTG，37℃，220rpm分别诱导了2h、8h和19h，跑了SDS-PAGE，均没有看到目标蛋白。 表达载体是pET28a，用的BL21（DE3）。重组质粒有测序过，转录方向都对。转化好了之后先转接过夜，第二天加在8mL的LB培养基里10%的菌液，37℃，220rpm摇到OD值差不多是0.6（有时候摇4h，有时候得八九个小时），再诱导。 我的蛋白是一个动物蛋白46kDa，连了6×His。 请问各位大侠，可能是什么原因？