诱导表达不出蛋白
ZhangDss
我用0.1、0.5、1、2、4mM的IPTG，37℃，220rpm分别诱导了2h、8h和19h，跑了SDS-PAGE，均没有看到目标蛋白。
表达载体是pET28a，用的BL21（DE3）。重组质粒有测序过，转录方向都对。转化好了之后先转接过夜，第二天加在8mL的LB培养基里10%的菌液，37℃，220rpm摇到OD值差不多是0.6（有时候摇4h，有时候得八九个小时），再诱导。
我的蛋白是一个动物蛋白46kDa，连了6×His。
请问各位大侠，可能是什么原因？
3 个回答
ZhangDss
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后来实验室的老师建议我用BL21（DE3）plys表达，现在还在试，不知道是不是菌种的原因。
冒险者0417
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原核表达效果不好最简单高效的方法就是换表达菌和表达质粒，至于OD值，IPTG浓度，温度，时间之类的很多时候只能锦上添花（特殊蛋白除外），有这功夫不如换下质粒和表达菌株。
ZhangDss
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求助老师，老师叫我大量表达看能不能用镍柱挂出来，结果是挂出来了！但是表达量太低的缘故，老师建议密码子优化～
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