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        相关实验:表达蛋白检测实验

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        dxy_oxqprwm6

        最近想跑个非变性胶,但是marker都下不来,最多能跑下来200kDa分子量的蛋白。请问高分子量的蛋白应该怎么跑非变性胶

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        2 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        电压一般设置 110 V,其他也是可以的,一般 85~150 V 都问题不大,电压太大速度快但会产热大,电压太小速度太慢。可以让蓝色上样缓冲跑出来后,再跑上 20 min;大分子建议延长电泳时间。

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        loveliufudan

        有帮助

        如果你在非变性胶上无法将高分子量的蛋白下降,以下是一些建议:

        1. 更换胶的百分比:尝试使用更低的聚丙烯酰胺凝胶百分比。常规非变性胶的聚丙烯酰胺凝胶百分比通常适用于小到中等分子量的蛋白,对于高分子量的蛋白可能不够敏感。尝试使用较低百分比的凝胶(例如8%或10%)可能有助于更好地分离高分子量的蛋白。

        2. 增加硫酸酚胺(SDS)浓度:SDS是非变性胶的常规成分,可将蛋白质解离并赋予负电荷。增加SDS浓度可以提高蛋白质的解离效果,有助于更好地分离高分子量的蛋白。尝试增加SDS浓度(例如从0.1%增加到0.2%)可以改善分离效果。

        3. 增加电泳时间:对于高分子量的蛋白,可能需要延长电泳时间以增加迁移距离。尝试延长电泳时间,以确保高分子量蛋白有足够的时间迁移到合适的位置。

        4. 考虑使用其他电泳方法:如果非变性胶仍无法满足你的需求,可以考虑使用其他电泳方法。例如,可以尝试使用聚丙烯酰胺梯度凝胶或淀粉凝胶电泳,这些方法适用于高分子量蛋白的分离。

        5. 注意蛋白质加载量:确保加载足够的蛋白质,以确保蛋白带有足够的强度。如果加载量过低,可能导致带宽模糊或无法检测到。

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