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        请教,为什么扩不出来

        丁香园论坛

        1837
        基因序列cds,引物,目的片段如下:
        atggggacgccgggggaggggctg
        301 ggccgctgctcccatgccctgatccggggagtcccagagagcctggcgtcgggggaaggt
        361 gcgggggctggccttcccgctctggatctggccaaagctcaaagggagcacggggtgctg
        421 ggaggtaaactgaggcaacgactggggctacagctgctagaactgccacctgaggagtca
                                                                                     >>>>>>>>>>>

        481 ttgccgctgggaccgctgcttggcgacacggccgtgatccaaggggacacggccctaatc
              >>> *****************************************

          541 acgcggccctggagccccgctcgtaggccagaggtcgatggagtccgcaaagccctgcaa
              ***********************************************************~Kbr_~H~M~2~1~Kbr_~H~M~2~1  601 gacctggggctccgaattgtggaaataggagacgagaacgcgacgctggatggcactgac
              ***********************************************************~Kbr_~H~M~2~1~Kbr_~H~M~2~1  661 gttctcttcaccggccgggagtttttcgtaggcctctccaaatggaccaatcaccgagga
              ********_~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~Kbr_~H~M~2~1                                                            aggtttacctggttagtggc
          721 gctgagatcgtggcggacacgttccgggacttcgccgtctccactgtgccagtctcgggt
          781 ccctcccacctgcgcggtctctgcggcatggggggacctcgcactgttgtggcaggcagc
          841 agcgacgctgcccaaaaggctgtccgggcaatggcagtgctgacagatcacccatatgcc
          901 tccctgaccctcccagatgacgcagctgctgactgcctctttcttcgtcctgggttgcct
          961 ggtgtgccccctttcctcctgcaccgtggaggtggggatctgcccaacagccaggaggca
          1021 ctgcagaagctctctgatgtcaccctggtacctgtgtcctgctcagaactggagaaggct
          1081 ggcgccgggctcagctccctctgcttggtgctcagcacacgcccccacagctga
           KEYS (in order of precedence):
        ~undefined****_target~Kbr_~H~M~2~1~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J_left_primer_: ccacctgaggagtcattgc
        <<<<<< right primer : aggtttacctggttagtggc
          Tm值60℃左右。PCR条件为:94℃,30S;55℃,30S;72℃,60S,35CYCLES.
        没扩到目的片段,只有β-actin.
        谁能帮我分析一下原因,谢谢!
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