免疫沉淀法

1. 培养细胞，用病毒感染细胞（见基本方案 4 步骤 1～4）。

2. 加入 2 ml 的完全 MEM-5 培养基，按所选用启动子的类型决定培养时间：早期启动子为感染后的 1~6 h；晚期启动子为感染后的 4~20 h。

3. 吸出培养基，加入含有 25~50 mCi [³⁵S] 蛋氨酸或 [³⁵S] 半胱氨酸的 0.5 ml 完全不含蛋氨酸或半胱氨酸的 MEM-5 培养基和 35 μl 完全 MEM-5 培养基，培养 2~3 h 到过夜。

4. 追加 0.15 ml 的完全 MEM-5 培养基，继续培养 1 h。

5. 吸出培养基，如果是分泌型表达蛋白则保存培养基。

如果分析培养基，将其离心 3 min 以去掉残留的细胞。

6. 加入 1 ml 的 PBS，刮下细胞，将其转入微量离心管，室温最大转速离心 3 min，弃上清。

7. 用 200 μl 细胞裂解液重悬细胞，涡旋混匀并在冰上放置 10 min。

8. 40℃，最大转速离心 10 min。吸出上清，进行免疫沉淀。

1. 此单元的培养都在加湿的 37℃ 5% CO₂ 培养箱中进行，除非有特殊说明。

2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的，操作也必须是无菌操作。