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        表达蛋白检测实验

        实验分类:

        蛋白质实验

        最新修订时间:

        简介

        蛋白表达常用检测实验,包括免疫印迹法、免疫沉淀法、点印迹法等。

        来源:丁香实验

        操作方法

        免疫印迹法

        1. 用生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞建立病毒感染细胞培养液(见基本方案 1 步骤 1~5)。2. 用完全 MEM-5 培养基将 5×105 细胞/孔放入 6 孔组织培养板培养(每孔终体积为 2 ml)。直至细胞汇片生长(应小于 24 h)。3. 在使用前,将一定体积的痘苗病毒储液与 0.25 mg/ml 胰酶混合,涡旋混匀。在 37℃ 水浴锅中保温 30 min,并在保温过程中每隔 5~1

        免疫沉淀法

        1. 培养细胞,用病毒感染细胞(见基本方案 4 步骤 1~4)。2. 加入 2 ml 的完全 MEM-5 培养基,按所选用启动子的类型决定培养时间:早期启动子为感染后的 1~6 h;晚期启动子为感染后的 4~20 h。3. 吸出培养基,加入含有 25~50 mCi [35S] 蛋氨酸或 [35S] 半胱氨酸的 0.5 ml 完全不含蛋氨酸或半胱氨酸的 MEM-5 培养基和 35 μl 完全 MEM

        点印迹法

        1. 病毒感染细胞并完成筛选(见「痘苗DNA检测实验」中「PCR 法」步骤 1~9)。2. 轻轻刮下细胞,转移到离心管中,最大转速离心 30 s,弃培养基,用 200 μl PBS 重悬。24 孔培养板中的细胞也可用 1 ml 的注射器的活塞刮取。3. 冻融并超声细胞悬液(见「痘苗DNA检测实验」中「PCR 法」步骤 11、12)。4. 将硝酸纤维素膜剪至适合点迹仪大小,将其用水浸湿,放入仪器中,

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