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WB条带问题
balalaLy
看图片没有很大的问题,只是背景有点脏,然后曝光比较强,可以降低一下曝光参数
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问
怎么理解一抗跟二抗 还有他们的专业书写方式,求指点
此用户已注销
一抗是与底物相结合的,同时一抗必须有抗原识别位点,能被另一种抗体识别并结合。二抗是能与一抗的抗原识别位点识别并结合,同时,二抗必须有可以观测、计量的性质。这些性质可以是:①二抗本身带有颜色,可以通过分光度仪检测到二抗的浓度;②二抗还可以作为一种酶,催化另一种底物,通过检测底物或者生成物的浓度检测出二抗的浓度;等等……有很多,就是说必须是可测量的。
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问
PVDF膜正反面曝光条带深浅一样吗
bamboopiggy
一样的,pvdf膜不用分反正,你知道分清楚自己的上样顺序就好。曝光条带的深浅是一样的。
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问
标准品并不是都可以做绝对定量分析
土井挞克树
是的,标准品有时只能作为参考,有的实验加入标准品后反倒是出现相反的结果
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问
纯化的蛋白做coIp
土井挞克树
考虑是杂质结合,既然是特异填料,一般不会出现这种情况
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问
请问跑PAGE条带有问题什么原因
bamboopiggy
你蛋白浓度有点高了,降一下蛋白浓度试试。
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问
基因敲除鼠敲除目的蛋白基因 受刺激为啥还能表达目的蛋白
bamboopiggy
你最好把文献贴上来,基因敲除分为全身敲除和组织特异性敲除,这两者之间就有很大区别。
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问
绝望了怎么回事???
bamboopiggy
感觉是你的胶在转膜过程中,裂开了。你三明治夹心做的不好。
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问
跑WB的一抗
bamboopiggy
现在国产的抗体不到一千块50ul,你可以找一些国产的公司申请试用装
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问
ELISA检测,稀释液OD值比原液高
圆圆v5
如果不是因为原液浓度太高导致HOOK了所以不显色,那就考虑这个ELISA是不是竞争法的原理,有些竞争法表现为浓度越高越不显色,这个可以对照定标曲线看出来。
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问
荧光多肽亲和力的测定可以用荧光酶标仪测荧光强度来实现吗
土井挞克树
我觉得你这个思路是可行的,但是你在没有标准度的情况下,如果你首次测定的最大浓度有问题,那么后续实验结果则不能保证正确
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问
求助 | 光敏蛋白不表达
今天加点happy
你好,请问你切片后怎么保存呢?脑片风干了吗?还是切完直接放放冰箱?4度还是负20呢?封片了吗?
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问
请问WB电泳时 marker消失
vlinine
marker消失显然是由于marker降解造成的
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问
蛋白非变性PAGE电泳
土井挞克树
凝胶配的浓度不合适也会影响电泳的,如果凝胶没问题,那么是否酸碱度不合适,没有分离出电泳带
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问
wb p53蛋白
灵枢天问
背景太高了,然后你的marker是用的可显影的么,先找对抗体,然后封闭的时候时间不要太长
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问
求助 救救孩子吧,原核表达的蛋白一直诱导不出来是啥原因
Topmicro
测序结果正确但是pcr条带位置奇怪的话应该是你设计问题,不应该是诱导剂的问题,建议你再捋一遍自己的序列。
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问
毕赤酵母胞内表达
灵枢天问
换个抗体吧,你再查查文献看看有没有特异性更高的抗体
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问
wb翻车了,求解答
Dr_劉医生
出现非特异性的杂带可能是抗体纯度不够,高纯度抗体条带特异性更好,建议更换抗体;此外也可以加长BSA封闭时间,和洗膜的时候多洗几次可以降低杂带干扰
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问
市场上的脱脂牛奶可以直接用来封闭吗?
Dr_劉医生
可以用,脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。但也只能用WesterBlot,如果要做ELISA或者phage display时候,蛋白铺板的话,不能使用脱脂奶粉。
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问
WB条带
此用户已注销
电泳缓冲液用的次数过多,一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差
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