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问
纯化的蛋白做coIp
土井挞克树
考虑是杂质结合,既然是特异填料,一般不会出现这种情况
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问
请问跑PAGE条带有问题什么原因
bamboopiggy
你蛋白浓度有点高了,降一下蛋白浓度试试。
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问
基因敲除鼠敲除目的蛋白基因 受刺激为啥还能表达目的蛋白
bamboopiggy
你最好把文献贴上来,基因敲除分为全身敲除和组织特异性敲除,这两者之间就有很大区别。
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问
绝望了怎么回事???
bamboopiggy
感觉是你的胶在转膜过程中,裂开了。你三明治夹心做的不好。
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问
跑WB的一抗
bamboopiggy
现在国产的抗体不到一千块50ul,你可以找一些国产的公司申请试用装
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问
ELISA检测,稀释液OD值比原液高
圆圆v5
如果不是因为原液浓度太高导致HOOK了所以不显色,那就考虑这个ELISA是不是竞争法的原理,有些竞争法表现为浓度越高越不显色,这个可以对照定标曲线看出来。
4 回答
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问
荧光多肽亲和力的测定可以用荧光酶标仪测荧光强度来实现吗
土井挞克树
我觉得你这个思路是可行的,但是你在没有标准度的情况下,如果你首次测定的最大浓度有问题,那么后续实验结果则不能保证正确
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问
求助 | 光敏蛋白不表达
今天加点happy
你好,请问你切片后怎么保存呢?脑片风干了吗?还是切完直接放放冰箱?4度还是负20呢?封片了吗?
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问
请问WB电泳时 marker消失
vlinine
marker消失显然是由于marker降解造成的
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问
蛋白非变性PAGE电泳
土井挞克树
凝胶配的浓度不合适也会影响电泳的,如果凝胶没问题,那么是否酸碱度不合适,没有分离出电泳带
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问
wb p53蛋白
灵枢天问
背景太高了,然后你的marker是用的可显影的么,先找对抗体,然后封闭的时候时间不要太长
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问
求助 救救孩子吧,原核表达的蛋白一直诱导不出来是啥原因
Topmicro
测序结果正确但是pcr条带位置奇怪的话应该是你设计问题,不应该是诱导剂的问题,建议你再捋一遍自己的序列。
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问
毕赤酵母胞内表达
灵枢天问
换个抗体吧,你再查查文献看看有没有特异性更高的抗体
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问
wb翻车了,求解答
Dr_劉医生
出现非特异性的杂带可能是抗体纯度不够,高纯度抗体条带特异性更好,建议更换抗体;此外也可以加长BSA封闭时间,和洗膜的时候多洗几次可以降低杂带干扰
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问
市场上的脱脂牛奶可以直接用来封闭吗?
Dr_劉医生
可以用,脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。但也只能用WesterBlot,如果要做ELISA或者phage display时候,蛋白铺板的话,不能使用脱脂奶粉。
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问
WB条带
此用户已注销
电泳缓冲液用的次数过多,一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差
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问
干细胞诱导分化出现的问题
申东熙老伯
会受代数影响,建议使用传代次数小一些的干细胞。
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问
加药处理细胞后wb结果不呈趋势
cq2019
我觉得这个问题其实复杂,包括客观因素和主观因素。客观上讲,不同批次的细胞不同状态的细胞都有可能出现表达量不一致的情形,此外实验条件和样本的浓度,加样的量都会有误差;主观上来说,个人操作的原因,不同批次出的结果可能由于人的操作出站差异,我的习惯是可以同一批次一般不同的人同时做这个实验。
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问
基质金属蛋白酶WB求助
此用户已注销
样品处理中使用的设备或缓冲液应在冰上(4 ℃)冷藏保存。尽可能使用预冷的试剂和设备,可以减缓去磷酸化、蛋白水解和变性。在裂解缓冲液中加入磷酸酶抑制剂,否则轻者条带不明显,重者没有条带。最好是添加新鲜配制的蛋白酶-磷酸酶抑制剂混和物,蛋白定量后,将样品与上样缓冲液混合,遏制磷酸酶活性。随后可以将样本等分并储存在冰箱中或加载到凝胶上。
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问
请问WB条带怎么跑出来是这样的呢
balalaLy
有没有可能是你的蛋白表达出了问题?比如诱导表达是不是成功?蛋白表达后是位于哪里?
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