加药处理细胞后wb结果不呈趋势
小裁决
一种细胞几个孔加药不同浓度（0 5 10 20uM）或不同时间（0 6 12 24 36 48h）处理，提蛋白跑wb结果不呈趋势递增或递减，而是有时候一高一低一高一低，或者本来该递减的它却递增了，内参是齐的，老师总说我们样本搞反了，就是加药加错孔、提蛋白次序搞反或者电泳加样加反，但是我出现过很多次这种情况，师妹们也经常有这种情况，如果说一次两次这种情况可能是样本搞反，但是总不能经常搞反吧？而且也不能总是犯这种低级错误吧？还有就是我对加药提蛋白和加样的过程很肯定没有搞反，所以我觉得不是这个原因，但是老师说不是这样的话没办法解释，我也实在是找不到其他原因，除了这个原因还有什么可能会导致这种结果的出现呢？
5 个回答
cq2019
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我觉得这个问题其实复杂，包括客观因素和主观因素。客观上讲，不同批次的细胞不同状态的细胞都有可能出现表达量不一致的情形，此外实验条件和样本的浓度，加样的量都会有误差；主观上来说，个人操作的原因，不同批次出的结果可能由于人的操作出站差异，我的习惯是可以同一批次一般不同的人同时做这个实验。
balalaLy
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这种情况可能是显影的问题，我也试过有这样的情况。有时候同一条条带第一次显影是递增趋势，再显一次就出现递减趋势。可以换普通的显影液显影，不要用超敏的。
bamboopiggy
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你换个内参试试，可能这个内参不合适，再就是你是不是药物浓度高了，活细胞就少，提的蛋白就少
汤姆卜丽波
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有可能是这个药物本身是有最适作用浓度的它针对细胞就是呈现一种先增后减的趋势，你可以往这方面想想总结一下
秋秋欣欣
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每次wb之前有检测转染效率吗，而且本来wb结果就很悬，如果有几次符合自己预期就可以
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