请问WB条带怎么跑出来是这样的呢
dxy_p6vjhl75
菌液20毫升，离心后用500微升重悬，加入上样缓冲液煮样10min，取了40微升上样，第一天跑出来无明显条带，但是在目的条带出有弥散现象，所以第二天取了40微升，离心后吸取上清液20微升重新上样，条带如下图所示
使用15％的预制胶， 电泳时间1H,140V 转膜时间60V，2H mpbs封闭两小时，hPR标记的his抗体孵育一小时，PBST洗膜4次，TMB显色
这两个蛋白之前表达过，但是目前重复六七次，再也没出现过清晰地条带
辛苦大家解答了
3 个回答
balalaLy
有帮助
有没有可能是你的蛋白表达出了问题？比如诱导表达是不是成功？蛋白表达后是位于哪里？
dxy_p6vjhl75
一个是12kda，一个是16kda
bamboopiggy
有帮助
你最好取上清测一下蛋白浓度，我感觉是你上样量有问题。
dxy_p6vjhl75
请问上样量会存在什么问题呢？
汤姆卜丽波
有帮助
有可能是你的蛋白存在降解或者是胶的浓度没选对
dxy_p6vjhl75
蛋白只有10到15kda，所以选择了15％的预制胶
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