实验问答22,817,322 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么做WB实验时目的蛋白位点会严重偏移，例如36位点的Gapdh有时会在30左右的位点？

相似又互补

会不会你用的marker不行，换一个别的品牌marker试试看

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问Wb跑胶下层跑歪了怎么回事

sswei

可能存在胶没有配好，有气泡，界面不平等情况。

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问W B可以检测IL-6或者IL-8吗？

相似又互补

可以检测的，细胞或者组织都可以

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问糖基化工程抗体

sswei

糖基化工程抗体：具有修饰的糖分子，被设计用于帮助免疫系统攻击癌细胞。治疗性抗体对抗癌症的可能方法之一是通过结合肿瘤细胞表面的蛋白，标记这些细胞使免疫系统进行攻击。该攻击信号通过粘附于抗体尾端的糖分子（称为“糖基化”）进行部分控制。实验室研究显示改变这些糖型，科学家能够促进抗体药物作用于免疫系统，该免疫系统可能增强其攻击肿瘤的能力。

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问wb条带目的蛋白下面一片黑

求求不要翻车啦

可能是封闭时间比较短，洗膜没洗干净，一抗浓度适当降低，等等

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问泛素化检测的免疫共沉淀怎么看

dxy_f4arku03

dasdasdasdsadsadad

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问请教两组小鼠取血量不一样做ELISA有问题吗？

sswei

离心取上清液需要保证上清液得到纯化，这样才能保证ELISA不出问题。

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问求助：WesternBlot数据均一化时可以以阳性对照组为一吗

balalaLy

也是可以的，得看你怎么说明解释。

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问氰基硼氢化钠

sswei

储存氰基硼氢化钠时，应避免过热及接触火源、水、潮湿空气、强酸或强氧化剂。氰基硼氢化钠遇强酸会立即生成氰化氢，与空气中的水分接触也会逐渐分解生成氰化物，使用时必须小心。远离酸、氧化剂。

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问IP急求，好几次了做不出来

loveliufudan

有以下几点建议：确认蛋白质表达水平首先需要确认蛋白质确实存在且表达水平足够高。您可以尝试增加过表达的细胞培养时间或使用更高浓度的诱导剂来增加目的蛋白表达水平。确认抗体的特异性和工作条件确保使用的抗体是特异性的，并且在所用的条件下（稀释倍数、结合时间、温度等）表现出最佳的特异性和灵敏度。可以尝试使用不同稀释倍数的一抗和二抗，调整结合时间和温度等条件，以优化WB实验的结果。优化IP实验条件在IP实验中

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问带MBP标签的蛋白纯化

loveliufudan

MBP标签通常被用于帮助纯化目的蛋白，但是有时MBP标签本身会从目的蛋白中脱离。这可能是由于以下原因之一：蛋白结构域：MBP标签可能位于目的蛋白的结构域中，这可能导致MBP标签在纯化过程中被蛋白酶剪切或脱离。蛋白不稳定：目的蛋白可能不稳定，并且在纯化过程中会失去MBP标签。未正确装配：MBP标签可能未正确装配到目的蛋白中，导致MBP标签在纯化过程中被去除。纯化条件不当：使用的纯化条件可能不适合MB

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问page电泳

sswei

SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种用于根据蛋白质混合物的大小分离其成分的分析方法。该技术基于这样的原理，即带电分子将在电场中朝具有相反符号的电极迁移。常规电泳技术不能用于确定生物分子的分子量，因为物质在凝胶中的迁移率取决于电荷和大小。为了克服这个问题，需要对生物样品进行处理，以使其获得均匀的电荷，然后电泳迁移率主要取决于尺寸。对于这种具有不同形状和大小的蛋白质分子，需要进行变性（在SDS

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问新城疫V蛋白

loveliufudan

新城疫（Newcastle disease）是一种禽流感病毒，也称为鸟流感。V蛋白是该病毒表面的糖蛋白质之一，具有重要的免疫学意义。请提出你的具体问题。

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问RIP结果分析

loveliufudan

在 RIP 实验中，IP 组通常是指经过免疫沉淀后的 RNA-蛋白质复合物样品，也称为 IP（immunoprecipitation）组，而 Input 组是未经过免疫沉淀的总 RNA 样品。根据 RIP 实验的原理，IP 组中的 RNA 应该是与特定蛋白质结合的 RNA，因此相对于 Input 组，IP组中 RNA 的含量可能会更少，CT 值也可能会更高。不过，这个结果也可能受到实验条件、抗体质

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问荧光染色问题，DAPI,凋亡等讨论

loveliufudan

DAP1 是一个在细胞质中发挥作用的蛋白质，其染色结果的质量可能会受到细胞状态的影响。如果细胞密度太低或者染色时间太短，可能会导致 DAP1 染色不均匀或者染色强度不足。因此，在进行 DAP1 染色时，需要控制好细胞密度和染色时间，以获得较为准确的染色结果。TUNEL 染色是一种用于检测凋亡细胞的方法，其染色结果主要出现在胞质中。如果 TUNEL 染色出现在胞质中而没有出现在核中，可能是细胞处理过

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问WB中变性过的蛋白上样前需再煮吗？

是TTT

一般不需要。但是如果冻存时间太久，拿出来离心有沉淀的话可以再煮几分钟。

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问DnsCl衍生时，连接伯胺的C原子上需要有H吗

loveliufudan

在进行DNS-Cl（2,4-二硝基氯苯）的化学反应时，连接到伯胺的C原子上通常需要有氢。因为DNS-Cl与氨基（-NH2）反应时，会发生亲核取代反应，生成DNS-NH-C的结构。在这个反应中，DNS-Cl的NO2基将取代C原子上的氢，形成DNS-NH-C结构。至于连接在C=N键上的C的伯胺是否可以被衍生，这取决于衍生试剂的反应性和它们对于C=N键的亲核或电子亲和性。一般来说，C=N键上的碳原子较为

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问WB条带中间好像有一个大印子是什么原因啊

loveliufudan

这可能是由于以下原因之一：过度曝光：当暴露时间过长时，较暗的条带会变得更暗，并且可以出现一个大的印子。这通常可以通过优化暴露时间来避免。过量的蛋白质加载：如果在Western blot中加载了过多的蛋白质，可能会导致印子变大或模糊不清。尝试减少样品中的蛋白质浓度或者优化Western blot实验的条件。不均匀的转印：如果转印膜的转印效率不均匀，则可能会出现大的印子。确保均匀地转印蛋白质样品可以避

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问Western

loveliufudan

Western blot分析中出现背景干扰和非特异性条带通常是由以下几个原因引起的：细胞裂解不充分：如果没有彻底裂解细胞，残留的细胞组分可能会与检测目标交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强。靶蛋白含量过低：如果目标蛋白含量太低，可能无法被充分检测到，从而导致非特异性条带和背景信号增强。抗体特异性不佳：如果使用的抗体与非特异性结构类似的蛋白结合，可能会引起交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强

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问WB的上样浓度

loveliufudan

一般来说，上样浓度应该根据样品浓度、希望检测的蛋白质浓度和电泳系统的灵敏度来确定。上样浓度过高会导致样品堆积和条带模糊，而上样浓度过低会导致信号弱。通常情况下，建议将上样浓度设置在1-4之间。在优化实验时，可以使用不同的上样浓度进行试验，并比较结果，选择最佳的上样浓度。此外，还可以尝试调整其他实验条件，例如运行时间、电泳缓冲液pH值、电压等，以获得最佳的结果。

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