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实验问答23,452,018 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问求助：WesternBlot数据均一化时可以以阳性对照组为一吗

balalaLy

也是可以的，得看你怎么说明解释。

3 回答654 围观

问氰基硼氢化钠

sswei

储存氰基硼氢化钠时，应避免过热及接触火源、水、潮湿空气、强酸或强氧化剂。氰基硼氢化钠遇强酸会立即生成氰化氢，与空气中的水分接触也会逐渐分解生成氰化物，使用时必须小心。远离酸、氧化剂。

3 回答812 围观

问IP急求，好几次了做不出来

loveliufudan

有以下几点建议：确认蛋白质表达水平首先需要确认蛋白质确实存在且表达水平足够高。您可以尝试增加过表达的细胞培养时间或使用更高浓度的诱导剂来增加目的蛋白表达水平。确认抗体的特异性和工作条件确保使用的抗体是特异性的，并且在所用的条件下（稀释倍数、结合时间、温度等）表现出最佳的特异性和灵敏度。可以尝试使用不同稀释倍数的一抗和二抗，调整结合时间和温度等条件，以优化WB实验的结果。优化IP实验条件在IP实验中

3 回答551 围观

问带MBP标签的蛋白纯化

loveliufudan

MBP标签通常被用于帮助纯化目的蛋白，但是有时MBP标签本身会从目的蛋白中脱离。这可能是由于以下原因之一：蛋白结构域：MBP标签可能位于目的蛋白的结构域中，这可能导致MBP标签在纯化过程中被蛋白酶剪切或脱离。蛋白不稳定：目的蛋白可能不稳定，并且在纯化过程中会失去MBP标签。未正确装配：MBP标签可能未正确装配到目的蛋白中，导致MBP标签在纯化过程中被去除。纯化条件不当：使用的纯化条件可能不适合MB

2 回答1864 围观

问page电泳

sswei

SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种用于根据蛋白质混合物的大小分离其成分的分析方法。该技术基于这样的原理，即带电分子将在电场中朝具有相反符号的电极迁移。常规电泳技术不能用于确定生物分子的分子量，因为物质在凝胶中的迁移率取决于电荷和大小。为了克服这个问题，需要对生物样品进行处理，以使其获得均匀的电荷，然后电泳迁移率主要取决于尺寸。对于这种具有不同形状和大小的蛋白质分子，需要进行变性（在SDS

4 回答962 围观

问新城疫V蛋白

loveliufudan

新城疫（Newcastle disease）是一种禽流感病毒，也称为鸟流感。V蛋白是该病毒表面的糖蛋白质之一，具有重要的免疫学意义。请提出你的具体问题。

2 回答362 围观

问RIP结果分析

loveliufudan

在 RIP 实验中，IP 组通常是指经过免疫沉淀后的 RNA-蛋白质复合物样品，也称为 IP（immunoprecipitation）组，而 Input 组是未经过免疫沉淀的总 RNA 样品。根据 RIP 实验的原理，IP 组中的 RNA 应该是与特定蛋白质结合的 RNA，因此相对于 Input 组，IP组中 RNA 的含量可能会更少，CT 值也可能会更高。不过，这个结果也可能受到实验条件、抗体质

2 回答4231 围观

问荧光染色问题，DAPI,凋亡等讨论

loveliufudan

DAP1 是一个在细胞质中发挥作用的蛋白质，其染色结果的质量可能会受到细胞状态的影响。如果细胞密度太低或者染色时间太短，可能会导致 DAP1 染色不均匀或者染色强度不足。因此，在进行 DAP1 染色时，需要控制好细胞密度和染色时间，以获得较为准确的染色结果。TUNEL 染色是一种用于检测凋亡细胞的方法，其染色结果主要出现在胞质中。如果 TUNEL 染色出现在胞质中而没有出现在核中，可能是细胞处理过

3 回答3474 围观

问WB中变性过的蛋白上样前需再煮吗？

是TTT

一般不需要。但是如果冻存时间太久，拿出来离心有沉淀的话可以再煮几分钟。

12 回答8446 围观

问DnsCl衍生时，连接伯胺的C原子上需要有H吗

loveliufudan

在进行DNS-Cl（2,4-二硝基氯苯）的化学反应时，连接到伯胺的C原子上通常需要有氢。因为DNS-Cl与氨基（-NH2）反应时，会发生亲核取代反应，生成DNS-NH-C的结构。在这个反应中，DNS-Cl的NO2基将取代C原子上的氢，形成DNS-NH-C结构。至于连接在C=N键上的C的伯胺是否可以被衍生，这取决于衍生试剂的反应性和它们对于C=N键的亲核或电子亲和性。一般来说，C=N键上的碳原子较为

3 回答338 围观

问WB条带中间好像有一个大印子是什么原因啊

loveliufudan

这可能是由于以下原因之一：过度曝光：当暴露时间过长时，较暗的条带会变得更暗，并且可以出现一个大的印子。这通常可以通过优化暴露时间来避免。过量的蛋白质加载：如果在Western blot中加载了过多的蛋白质，可能会导致印子变大或模糊不清。尝试减少样品中的蛋白质浓度或者优化Western blot实验的条件。不均匀的转印：如果转印膜的转印效率不均匀，则可能会出现大的印子。确保均匀地转印蛋白质样品可以避

3 回答410 围观

问Western

loveliufudan

Western blot分析中出现背景干扰和非特异性条带通常是由以下几个原因引起的：细胞裂解不充分：如果没有彻底裂解细胞，残留的细胞组分可能会与检测目标交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强。靶蛋白含量过低：如果目标蛋白含量太低，可能无法被充分检测到，从而导致非特异性条带和背景信号增强。抗体特异性不佳：如果使用的抗体与非特异性结构类似的蛋白结合，可能会引起交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强

4 回答418 围观

问WB的上样浓度

loveliufudan

一般来说，上样浓度应该根据样品浓度、希望检测的蛋白质浓度和电泳系统的灵敏度来确定。上样浓度过高会导致样品堆积和条带模糊，而上样浓度过低会导致信号弱。通常情况下，建议将上样浓度设置在1-4之间。在优化实验时，可以使用不同的上样浓度进行试验，并比较结果，选择最佳的上样浓度。此外，还可以尝试调整其他实验条件，例如运行时间、电泳缓冲液pH值、电压等，以获得最佳的结果。

4 回答1011 围观

问请问怎样分离和提纯Igf2呀

sswei

采用层析色谱结合生化提取的方法。

3 回答469 围观

问泛素化酶

loveliufudan

确定泛素化的底物靶蛋白后，找到对应的 E1、E2 和 E3 酶通常需要进行以下步骤：文献调研：首先，需要通过查阅相关的文献资料，了解泛素化底物靶蛋白的泛素化机制。文献中通常会提到用于底物靶蛋白泛素化的 E1、E2 和 E3 酶。数据库搜索：在确定了 E1、E2 和 E3 酶的可能性后，可以利用生物信息学数据库如UniProt、NCBI等进行搜索，查找这些蛋白质的基本信息、功能描述和相互作用网络等。

3 回答459 围观

问电感耦合等离子质谱仪

sswei

粉末/块状样品一般提供100mg以上。

3 回答513 围观

问WB电泳-溴芬兰跑出3条带

土井挞克树

样本考虑有降解，重新纯化样本再跑

3 回答901 围观

问酵母单杂交相关求助！

dxy_rbusixu0

你好请问你最后转化成功了吗你的质粒浓度是多少呀

3 回答628 围观

问R语言用psm构建完nomogram后画校准曲线时报错

loveliufudan

根据您提供的代码，您可能是因为没有正确调用survest.psm()函数，导致在进行预测生存曲线时出现了错误。可以尝试以下更改代码：#nomogram构建rm(list=Is())library (Hmisc)library (grid)library(lattice)library (Formula)library (ggplot2)library(rms)library (survival)l

2 回答815 围观

问LPS诱导炎症模型用于后期实验是先做转染还是先诱导炎症

loveliufudan

在进行LPS诱导炎症模型后期实验时，一般的操作步骤是先诱导炎症，然后进行转染。这是因为LPS诱导炎症是一种化学物质处理的方式，能够诱导机体产生炎症反应，从而模拟实际的疾病情况，这是实验的基础。而转染则是在诱导炎症后对细胞进行基因转染，用于检测某些基因在炎症反应中的作用。具体而言，实验步骤可以如下进行：培养待处理的细胞系。给细胞系加入LPS，使其产生炎症反应。在产生炎症反应的同时，进行转染实验，将感

3 回答2010 围观

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