WB条带中间好像有一个大印子是什么原因啊

这可能是由于以下原因之一：

过度曝光：当暴露时间过长时，较暗的条带会变得更暗，并且可以出现一个大的印子。这通常可以通过优化暴露时间来避免。

过量的蛋白质加载：如果在Western blot中加载了过多的蛋白质，可能会导致印子变大或模糊不清。尝试减少样品中的蛋白质浓度或者优化Western blot实验的条件。

不均匀的转印：如果转印膜的转印效率不均匀，则可能会出现大的印子。确保均匀地转印蛋白质样品可以避免这个问题。

核酸污染：在Western blot分析中，核酸污染也可能导致条带中间出现一个大的印子。确保在分析中使用纯净的试剂和样品可以避免这个问题。

考虑是跑wb时有外源性的遮挡，可以检查一下

原因是过高的蛋白上样量或一抗和二抗浓度过高都会促使底物过快的消耗，导致我们在做化学发光检测时，发光底物已经消耗殆尽而形成空斑。或是转膜时候，膜与胶之间有气泡，需要在制作“三明治”时，注意赶走气泡。