• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        WB中变性过的蛋白上样前需再煮吗?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        残容美

        刚提的蛋白样品,加入5×loading buffer,100℃,10min变性,自然冷却后,冻存在负80℃冰箱。

        疑问:已经变性过的蛋白,从负80℃冰箱拿出来后,在上样之前还要不要再100℃,煮3分钟?

        wx-share
        分享

        12 个回答

        user-title

        是TTT

        有帮助

        一般不需要。

        但是如果冻存时间太久,拿出来离心有沉淀的话可以再煮几分钟。

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        来一起探讨

        有帮助

        不需要再次煮沸,只需恢复室温后,离心即可电泳

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        sswei

        有帮助

        WB中变性过的蛋白上样前不需要再煮。

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        建议蛋白煮沸后立即放冰上冷却,从-80拿出后解冻即可上样。

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        weiran0928

        有帮助

        不需要,煮沸目的是让蛋白质变性,改变其结构。冰冻不会使结构回复恢复正常,所以不需要再次煮沸变性。

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        相似又互补

        有帮助

        可以不用,混匀后可以直接上样了

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        NatureBios

        有帮助

        可以在上样前在煮一次这样让样本更均匀

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        不需要,已经变性过直接拿出来用就可以

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        有些公司的loading buffer比较粘稠建议煮一下

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        之前煮过可以不煮了,直接拿来用就可以

        user-title

        残容美user-title

        谢谢你

        user-title

        且行且尽力

        有帮助

        已经100°C变性过不需要再次变性

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        通常情况下,已经经过变性处理的蛋白样品在上样前不需要再次煮沸。这是因为变性处理会使蛋白质失去其原有的三维结构和活性,变成线性的、无电荷的多肽链。这些变性的蛋白质通常具有较高的稳定性,因此它们在冷冻保存时可以长期保持其变性状态。

        因此,您可以直接从负80°C冰箱中取出已变性的蛋白质样品,并在室温下将其解冻并直接上样。不需要再次进行煮沸处理。

        需要注意的是,如果您的样品在冷冻和解冻过程中发生了变化(例如出现颗粒物质或聚集物),则可能需要重新煮沸处理以确保蛋白质分子处于单个分散状态。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序