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问
敲降某甲基化转移酶以后,wb显示组蛋白H3K27me3和H3K4me3的水平不发生变化,请问是需要对细胞做什么处理再跑wb吗?
是TTT
你用的抗体是什么抗体呢,单甲基化抗体?
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问
细胞培养液中蛋白提取
sswei
酚抽提法1 在液氮中将 1g 菌体研磨为粉末2 加入 6 ml 水饱和酚(buffer-saturated phenol)和 2 ml提取液(20mMTris-Cl, pH 7.5, 0.5% Triton X-100 (v/v), 0.5M EDTA, pH 7.5, pH 8.0,0.07% β-巯基乙醇, protease inhibitors)。3 在4度混合30分钟。4 12000 rm
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问
外泌出细胞的蛋白如何验证
loveliufudan
验证外泌出的蛋白质通常可以通过以下步骤进行:收集上清液:将真菌孢子培养在适当的培养基上,培养至一定时间后,收集上清液。上清液中可能包含孢子释放出的外泌物蛋白质。蛋白质提取:将收集的上清液进行蛋白质提取。通常可以使用酸性异丙醇沉淀法、超声波法、直接浸泡法等方法进行蛋白质提取。蛋白质分离:将提取的蛋白质进行分离。可以使用SDS-PAGE、2D-PAGE等电泳技术进行分离。免疫检测:使用Western
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问
各位大佬,我这个样品跑不齐是什么原因呢
汤姆卜丽波
你的样品制备也有问题,多的那些适当降低上样量,同一批样品保证浓度一致
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问
内参GAPDH条带锯齿状,别人跑的都是直的
伏研飞2023
可能是胶的问题没凝好,也可能是电泳电压太大,主要可能还是配胶电泳的问题?
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问
请问WB条带有这种大印子是什么问题啊?
汤姆卜丽波
这个可能是你的封闭液有问题,你可以配完了过滤一下
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问
用药物阻断H226细胞中的YAP - TEAD通路后,通过IP实验提取出YAP和TEAD蛋白
是TTT
药物阻断前呢,这两个蛋白分子量在不同的位置吗?如果胶的配方,电泳等都一致的话,这两个分子阻断前后分子量不一样,可能是药物对他们发生了修饰左右,例如糖基化等等,可能会影响分子量
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问
慢病毒感染THP1怎么做?
梦见好多鱼
你好,请问你后来解决这个问题了吗?我最近在做THP1的慢病毒感染,一加病毒细胞就贴壁了。试了好几次都这样,求救。
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问
慢病毒感染巨噬细胞没有荧光怎么办?
loveliufudan
可以尝试以下方法:优化MOI(Multiplicity of Infection,感染倍数):不同的细胞类型可能需要不同的MOI。针对RAW264.7细胞,进行MOI梯度实验以确定最佳感染效果和细胞生长影响最小的MOI。使用增强感染试剂:在感染过程中添加增强感染试剂,如Polybrene,可以提高感染效率。请注意选择适当的浓度,避免对细胞产生毒性。调整病毒接触时间:增加病毒与细胞接触的时间。通常,
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问
coip的对照IP样品也有比较弱的目的条带怎么办?
loveliufudan
Co-IP实验中,对照IP样品(通常为非免疫(IgG)对照或不添加抗体对照)出现较弱的目的条带可能是非特异性结合或背景信号。为减少这种非特异性结合并改善实验结果,请尝试以下方法:清洗和预处理:确保充分清洗细胞裂解液和磁珠,以减少非特异性蛋白结合。预先用含有BSA或无抗原同源蛋白的缓冲液处理磁珠,以阻止非特异性结合位点。使用高质量抗体:确保使用特异性高且经过验证的抗体。低质量抗体可能导致非特异性结合
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问
wb条带灰度值分析数据处理?
AnythingGoes
可以考虑,将CT组三次的结果求一个平均值,使用ct1、ct2、ct3分别除以这个平均值得到一组带有bar值的ct组数据
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问
各位大佬们,能帮忙看看是什么原因吗?是不是转膜时间长了?本来有两个条带,现在也只出来了一条
相似又互补
你可以选择400ma转60分钟的
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问
有没有什么办法让ELISA标准曲线的截距值不那么高…
loveliufudan
以下是一些可能的解决办法:改变标准品的浓度。可以尝试增加或减少标准品的浓度,以使曲线的截距值适当。如果标准品的浓度过低,则可以增加标准品的浓度,如果标准品的浓度过高,则可以将其稀释。更换检测试剂盒。如果检测灵敏度过低,可以尝试更换其他品牌的试剂盒,以获得更好的灵敏度。调整检测条件。可以尝试调整ELISA的检测条件,例如改变底物浓度、反应时间等参数,以获得更好的灵敏度和准确性。改变分析方法。如果EL
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问
Calhm2的拮抗剂是什么?怎么把Calhm2和1分开,只拮抗其中的一种?
土井挞克树
EFhd2可以特异性下调Calhm2
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问
为什么在做酶联免疫吸附检测TNF-α酶标仪上的数据超过检测上限?除了浓度过高还有别的原因吗?
loveliufudan
除了样品中TNF-α浓度过高之外,导致酶联免疫吸附检测数据超过检测上限的可能原因还有以下几个:抗原表达量过高:如果你的样品中含有大量表达TNF-α的细胞或组织,可能会导致检测结果超过检测上限。检测方法不够灵敏:如果你使用的检测方法灵敏度不够高,也可能导致数据超过检测上限。操作错误:在进行酶联免疫吸附检测时,如果出现了操作错误,比如反应时间过长或者使用了过多的检测物,也可能导致数据超过检测上限。如果
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问
请问大家这个蛋白上样量再怎么调整吖?
汤姆卜丽波
我觉得多个一两微升不至于变化这么大,有可能是你蛋白降解了,重新提过保证蛋白浓度再跑
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问
有没有大佬能教一下影像组学怎么入门?
sswei
影像组学的研究对象是影像,它的研究方法则是将影像内包含的所有信息提取出来然后进行综合系统化分析。更确切的说,影像组学是采用自动化算法从影像的感兴趣区(ROI,region ofinterest)内提取出大量的特征信息作为研究对象,并进一步采用多样化的统计分析和数据挖掘方法从大批量信息中提取和剥离出真正起作用的关键信息,最终用于疾病的辅助诊断、分类或分级。工作流程包括以下阶段:(1) Imag
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问
高效液相进样要过夜的话最后怎么设置流动相冲洗柱子啊,怎么封柱子啊?
sswei
需过夜保存,可将流速保持在 0.1 到 0.2 mL/min。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
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问
重组蛋白镍柱纯化后去除咪唑的透析方法?
hTJL
师兄师姐,我想问问具体怎么透析?去除纯化后的可溶性蛋白?怎么将His纯化后的蛋白液经过半透膜扩散到不含咪唑的缓冲液或者?怎么透析啊
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问
怎么查找一个寄生虫的热休克蛋白(编码该蛋白的基因序列),
z流沙z
在ncbi上面,输入目的基因,选择相应种属后即可搜索出来
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