实验问答22,275,687 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问【求助】ELISA检测STC-1细胞上清中激素实验问题

loveliufudan

ELISA检测吸光度过低可能有多种原因，其中包括蛋白质降解、稀释过高、实验操作不当等。考虑到您检测的是细胞上清中GLP-1、CCK、PYY等蛋白质，蛋白质降解可能是一个可能的原因。如果您怀疑蛋白质降解可能影响ELISA检测结果，可以考虑加入蛋白酶抑制剂来保护蛋白质。蛋白酶抑制剂可以避免蛋白质在细胞上清中被降解，提高样品中蛋白质的浓度和稳定性。另外，您也可以考虑调整实验条件，如缩短采样时间、降低稀释

3 回答425 围观

问关于IFN-γ和TNF-α诱导特应性皮炎炎症细胞模型的问题。

土井挞克树

加入这两种物质是诱导凋亡的，所以你后续的浓度摸索是对的，可以采用后面的浓度梯度进行实验。

1 回答846 围观

问使用PLA检测蛋白质互作时需要对细胞进行通透处理吗？

此用户已注销

经过 4% 多聚甲醛固定后，可以使用0.2% TritonX-100透化。

3 回答601 围观

问请问动物实验中哪些抗氧化指标比较新？

loveliufudan

以下是一些比较新的指标：NRF2（核因子E2-相关因子2）：NRF2是一个关键的转录因子，能够促进细胞的抗氧化防御反应。在小鼠灌服实验中，可以通过检测NRF2水平来评估细胞抗氧化能力。HO-1（血红素氧合酶1）：HO-1是一个抗氧化酶，在细胞应激反应中起着重要的作用。HO-1的表达水平可以反映细胞的氧化应激状态。GPX4（谷胱甘肽过氧化物酶4）：GPX4是一种细胞内重要的抗氧化酶，能够清除细胞内的

2 回答972 围观

问请教一下普通WB做泛素化条带应该怎么设计实验呢

loveliufudan

如果您想检测p53的泛素化，可以将细胞或组织样品进行裂解，然后用p53抗体进行免疫共沉淀（IP），将泛素化的p53捕获下来，最后通过WB检测泛素化的产物。具体实验步骤如下：细胞或组织样品的裂解：将培养细胞或组织样品加入裂解缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂，离心裂解液去除细胞碎片和细胞核。免疫共沉淀：将裂解液加入p53抗体预先吸附的蛋白A/G琼脂糖糖珠中，免疫共沉淀泛素化的p53蛋白。如果您的样品中p53

3 回答7045 围观

问loading buffer连到一起呈锯齿状，上样量20ul,请问为什么会出现这种情况？

loveliufudan

很可能是loading buffer 没有完全溶解或没有彻底混合。可以首先尝试充分混合和完全溶解 loading buffer。

3 回答482 围观

问Elisa的结果只拍照可以吗？

汤姆卜丽波

一般来说ELisa不要求原始数据，应该没问题

3 回答702 围观

问敲降某甲基化转移酶以后，wb显示组蛋白H3K27me3和H3K4me3的水平不发生变化，请问是需要对细胞做什么处理再跑wb吗？

是TTT

你用的抗体是什么抗体呢，单甲基化抗体?

2 回答392 围观

问细胞培养液中蛋白提取

sswei

酚抽提法1 在液氮中将 1g 菌体研磨为粉末2 加入 6 ml 水饱和酚（buffer-saturated phenol）和 2 ml提取液（20mMTris-Cl, pH 7.5, 0.5% Triton X-100 (v/v), 0.5M EDTA, pH 7.5, pH 8.0,0.07% β－巯基乙醇, protease inhibitors）。3 在4度混合30分钟。4 12000 rm

3 回答438 围观

问外泌出细胞的蛋白如何验证

loveliufudan

验证外泌出的蛋白质通常可以通过以下步骤进行：收集上清液：将真菌孢子培养在适当的培养基上，培养至一定时间后，收集上清液。上清液中可能包含孢子释放出的外泌物蛋白质。蛋白质提取：将收集的上清液进行蛋白质提取。通常可以使用酸性异丙醇沉淀法、超声波法、直接浸泡法等方法进行蛋白质提取。蛋白质分离：将提取的蛋白质进行分离。可以使用SDS-PAGE、2D-PAGE等电泳技术进行分离。免疫检测：使用Western

2 回答831 围观

问各位大佬，我这个样品跑不齐是什么原因呢

汤姆卜丽波

你的样品制备也有问题，多的那些适当降低上样量，同一批样品保证浓度一致

3 回答264 围观

问内参GAPDH条带锯齿状，别人跑的都是直的

伏研飞2023

可能是胶的问题没凝好，也可能是电泳电压太大，主要可能还是配胶电泳的问题？

4 回答527 围观

问请问WB条带有这种大印子是什么问题啊？

汤姆卜丽波

这个可能是你的封闭液有问题，你可以配完了过滤一下

3 回答233 围观

问用药物阻断H226细胞中的YAP - TEAD通路后，通过IP实验提取出YAP和TEAD蛋白

是TTT

药物阻断前呢，这两个蛋白分子量在不同的位置吗?如果胶的配方，电泳等都一致的话，这两个分子阻断前后分子量不一样，可能是药物对他们发生了修饰左右，例如糖基化等等，可能会影响分子量

3 回答358 围观

问慢病毒感染THP1怎么做？

梦见好多鱼

你好，请问你后来解决这个问题了吗？我最近在做THP1的慢病毒感染，一加病毒细胞就贴壁了。试了好几次都这样，求救。

3 回答2377 围观

问慢病毒感染巨噬细胞没有荧光怎么办？

loveliufudan

可以尝试以下方法：优化MOI（Multiplicity of Infection，感染倍数）：不同的细胞类型可能需要不同的MOI。针对RAW264.7细胞，进行MOI梯度实验以确定最佳感染效果和细胞生长影响最小的MOI。使用增强感染试剂：在感染过程中添加增强感染试剂，如Polybrene，可以提高感染效率。请注意选择适当的浓度，避免对细胞产生毒性。调整病毒接触时间：增加病毒与细胞接触的时间。通常，

2 回答1027 围观

问coip的对照IP样品也有比较弱的目的条带怎么办？

loveliufudan

Co-IP实验中，对照IP样品（通常为非免疫（IgG）对照或不添加抗体对照）出现较弱的目的条带可能是非特异性结合或背景信号。为减少这种非特异性结合并改善实验结果，请尝试以下方法：清洗和预处理：确保充分清洗细胞裂解液和磁珠，以减少非特异性蛋白结合。预先用含有BSA或无抗原同源蛋白的缓冲液处理磁珠，以阻止非特异性结合位点。使用高质量抗体：确保使用特异性高且经过验证的抗体。低质量抗体可能导致非特异性结合

2 回答789 围观

问wb条带灰度值分析数据处理？

AnythingGoes

可以考虑，将CT组三次的结果求一个平均值，使用ct1、ct2、ct3分别除以这个平均值得到一组带有bar值的ct组数据

1 回答1043 围观

问各位大佬们，能帮忙看看是什么原因吗？是不是转膜时间长了？本来有两个条带，现在也只出来了一条

相似又互补

你可以选择400ma转60分钟的

2 回答260 围观

问有没有什么办法让ELISA标准曲线的截距值不那么高…

loveliufudan

以下是一些可能的解决办法：改变标准品的浓度。可以尝试增加或减少标准品的浓度，以使曲线的截距值适当。如果标准品的浓度过低，则可以增加标准品的浓度，如果标准品的浓度过高，则可以将其稀释。更换检测试剂盒。如果检测灵敏度过低，可以尝试更换其他品牌的试剂盒，以获得更好的灵敏度。调整检测条件。可以尝试调整ELISA的检测条件，例如改变底物浓度、反应时间等参数，以获得更好的灵敏度和准确性。改变分析方法。如果EL

3 回答324 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序