重组蛋白镍柱纯化后去除咪唑的透析方法？

师兄师姐，我想问问具体怎么透析？去除纯化后的可溶性蛋白？怎么将His纯化后的蛋白液经过半透膜扩散到不含咪唑的缓冲液或者？怎么透析啊

咪唑是一种常用的离子交换色谱层析洗脱剂，但咪唑会影响蛋白质的结构和活性，因此需要进行去除。一般来说，可以采用以下步骤进行咪唑的去除：

1. 用含有洗脱剂的洗涤缓冲液（如含有20 mM imidazole的洗涤缓冲液）洗脱重组蛋白，使咪唑逐渐被冲洗出去。

2. 将洗脱后的蛋白质进行透析，推荐使用去除咪唑的透析缓冲液（如含有20 mM Tris-HCl pH 7.5的透析缓冲液）。透析液的体积通常为蛋白质样品体积的10-20倍。

3. 对于较高浓度的咪唑，可以在透析液中加入抗咪唑剂（如1 mM 1,2,4-三唑）来促进咪唑的去除。

4. 透析的时间和更换透析液的时间取决于蛋白质的性质和咪唑的浓度。一般来说，推荐进行24小时的透析，并在每6-8小时更换一次透析液。如果咪唑的浓度很高，需要更换的频率可能会更高。

• 透析液的选择应该根据蛋白质的性质和实验要求而定，一般来说，可以选择与蛋白质缓冲液成分相同或相似的透析液。
• 透析时间一般在2-4小时之间。
• 更换透析液的时间也应该根据实验要求而定，一般建议在6-8小时和10-14小时（第二天早晨）更换透析液。

对于重组蛋白的镍柱纯化后需要去除咪唑的问题，可以考虑使用透析法进行脱盐和咪唑去除。下面是一些透析液的选择和透析时间的建议：

透析液的选择：一般使用含有缓冲剂（如Tris-HCl、PBS等）和较低盐度的缓冲液（如20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl）作为透析液。可以根据纯化后的蛋白质特性和所需要的离子强度选择适当的缓冲液。此外，可以添加去除咪唑的试剂（如乙二胺四乙酸）到透析液中。

透析时间：透析时间的长短取决于蛋白的特性和透析液的选择。一般来说，建议透析时间在12至24小时之间。

透析液的更换时间：建议在透析过程中每4至6小时更换透析液，以保证蛋白的去除咪唑的效率。

需要注意的是，在透析过程中，蛋白质的稳定性可能会受到影响，需要注意透析液的pH和温度的控制，以及避免使用过高浓度的蛋白质溶液进行透析。此外，还可以考虑使用其他的脱盐和咪唑去除方法，如柱层析、溶液浓缩等，具体选择方法需根据实验需要和蛋白质特性进行优化。

可以试试4℃透析，一共三次，每次7小时，透析液配方为PBS+10%Glycerol

可以进行透析，将His纯化后的蛋白液经过半透膜扩散到不含咪唑的缓冲液中。或是进行脱盐，His纯化后的蛋白液经过脱盐层析柱去除咪唑