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实验问答23,412,585 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问提取蛋白泡沫很多

huarenqiang5

可能是由于剧烈晃动了蛋白上清液产生的，对实验没什么影响。

4 回答981 围观

问泛素-蛋白酶体

loveliufudan

如果您想证明某药物通过泛素-蛋白酶体途径调控蛋白降解，您可以通过联合使用该药物和mg132等蛋白酶抑制剂，来验证该药物是否能够被蛋白酶体途径调控。一般来说，药物和蛋白酶抑制剂可以同时作用于细胞，或者先加入蛋白酶抑制剂，然后再加入药物，这可能取决于具体的实验条件和您的研究需求。以下是一种可能的联合用药方案：在细胞培养基中加入适量的mg132等蛋白酶抑制剂，用于抑制泛素-蛋白酶体途径的蛋白降解。在一定

3 回答783 围观

问WB显影整张膜都是黑的

dxy_xextz7w2

控制TBST的ph值在7.4左右可以改善大片黑的情况，但是如果改善不了可能是抗体的问题

5 回答9692 围观

问wb条带分析|蛋白跑出泳道；条带显示不全

loveliufudan

电泳不均匀或者样品加载不均匀导致蛋白质跑出了浓缩胶范围，同时转膜也存在不均匀的问题，导致某些条带显示不完整或者缺失。此外，实验中也可能存在其他因素，如抗体浓度、蛋白质含量等问题，也有可能影响结果。

3 回答2255 围观

问求助OX-LDL与LDL比较其电泳迁移率

loveliufudan

OX-LDL和LDL的电泳迁移率可能存在一定差异，因为OX-LDL经氧化后，脂质双层发生了结构改变，导致其电荷密度和分子大小发生变化，从而影响了其电泳迁移率。因此，建议您尝试调整电泳条件，优化实验流程，以更好地分离和检测LDL和OX-LDL。以下是一些可能有帮助的建议：优化琼脂糖凝胶浓度：您可以尝试增加琼脂糖凝胶的浓度，以提高分离效果和条带清晰度。一般情况下，0.8%的琼脂糖凝胶电泳可以分离LDL

2 回答442 围观

问求助wb内参条带问题

sswei

可能有转模不均匀，抗体特异性不高等原因

3 回答1014 围观

问wb成这样是什么原因呀是蛋白样品上多了吗

sswei

存在蛋白样品上样量太多，存在交叉反应或抗体浓度太高等原因。

4 回答443 围观

问血管平滑肌细胞膜片钳实遇到的问题求助

loveliufudan

您遇到的问题可能是由于以下原因导致的：细胞质溶液中的Ca2+浓度过高：高浓度的Ca2+会刺激平滑肌细胞收缩，因此需要控制细胞内外液中的Ca2+浓度，确保在实验过程中细胞不会受到过多的刺激。钳制电压过大：过大的钳制电压也可能导致平滑肌细胞收缩，因此需要逐渐调整钳制电压，找到合适的电压范围。内外液渗透压差异过大：内外液渗透压差异过大也可能导致细胞收缩，因此需要逐渐调整内外液的渗透压差异，确保在实验过程

2 回答512 围观

问关于RAW264.7细胞一氧化氮检测的问题

loveliufudan

一氧化氮(NO)在细胞中的产生通常是通过一氧化氮合酶(NOS)的催化反应完成的。在RAW264.7细胞中，诱导NOS的剂量和时间是关键因素，过低或过高的剂量或时间都可能导致NO测不出来的问题。另外，如果您使用的是颜色反应法或化学发光法等方法来检测NO，需要注意的是这些方法对样品中NO的灵敏度和特异性都有一定的要求。例如，颜色反应法中，如果存在其他氧化物质或化学物质可以干扰反应体系，则可能导致NO无

1 回答2116 围观

问感觉GM-CSF和IL-4诱导出来了巨噬

loveliufudan

可能是您诱导出了巨噬细胞。巨噬细胞在贴壁培养条件下容易形成集群，而且在细胞形态上与树突状细胞有所不同。您可以尝试使用其他方法（如细胞表面标记物、基因表达谱等）来确定这些细胞的类型。同时，为了避免因细胞的类型不确定而对实验结果造成影响，建议您进行相应的实验对照。

2 回答316 围观

问做WB时，小分子转膜时间怎么控制？

是TTT

普通Western转膜液200mA，一分钟转1kd，10-30kd转10-30分钟。小分子wb没有条带可能不在于转膜没成功，关键在电泳，可以调整下层胶浓度跑小分子蛋白

4 回答6480 围观

问分离胶百分之15，浓缩胶选多大的呀，

此用户已注销

浓缩胶一般都是5%的,下面的是5ML的配方,其余的你可以自己算了5mlH2O 3.6acrylamide mix（30%） 0.621M Tris(PH6.8) 0.6310% SDS 0.0510% AP 0.05TEMED 0.005

3 回答570 围观

问检测TERT的表达，分子量不太对，有杂带带

loveliufudan

很可能是样品的质量不佳，如受到不适当的处理、冻存和解冻等，导致蛋白质降解或变性，所以产生了杂带。

3 回答317 围观

问求教用LPS诱导Caco-2 细胞炎症的相关问题？

sci我的

用的什么牌子的lps？为什么我用浓度200μg/ml的染毒48h细胞没有死掉，活的很好？

4 回答1885 围观

问怎样保存2-D凝胶？？

sswei

1 可以把蛋白质斑点先放在硅化的EP管中，放置于4°冰箱保存一个月左右，对蛋白质修饰和结果搜索都没什么大问题；2 可以将蛋白质经过酶解成肽段后再萃取出来，冻干后放置－20°或者－70°保存，直至MALDI-TOF-MS 可以分析蛋白质为止。如果时间长的话，最好放置－70°保存最好；3 看胶上的染色情况，假如是拷染的话，将胶放置时间达到半年也没关系，银染的话，最好染色后立刻取差异点。甚至可以做成干胶

3 回答551 围观

问关于使用三氯醋酸沉淀法，如何解决蛋白质难于重悬？

loveliufudan

以下是一些可能的解决方案：增加重悬缓冲液的含量：将重悬缓冲液的体积增加，可以减少蛋白质在溶液中的浓度，有利于重悬。通常，可以将重悬缓冲液的体积增加到蛋白质沉淀物的5-10倍。增加重悬缓冲液中的蛋白质还原剂：将重悬缓冲液中的蛋白质还原剂浓度增加，有助于蛋白质的还原和重悬。常用的蛋白质还原剂包括二巯基乙醇（DTE）和二巯基丙酸（DTT）等。增加重悬缓冲液的pH值：增加重悬缓冲液的pH值可以改变蛋白质的

2 回答520 围观

问使用WB检测TERT蛋白，为什么分子量低于预期，为什么出现杂带！

sswei

分子量比预期低可能是由以下几个原因引起的：细胞提取和蛋白质浓度问题：如果提取细胞的质量和/或数量不足，或者蛋白质提取过程中出现问题，会导致蛋白质的含量不足。这可能会导致目的蛋白的表达水平低于预期。抗体问题：WB实验使用抗体来检测目的蛋白。如果使用的抗体出现问题，例如批次差异或失效，也可能导致目的蛋白的表达水平低于预期。转录后修饰问题：转录后修饰是指在蛋白翻译完成后对蛋白进行修饰，例如磷酸化、乙酰化

4 回答397 围观

问组织蛋白wb验证，内参跑出来一抹黑

sswei

使用过于粗糙或过于缓慢的洗膜步骤可能会导致高背景值。抗体过时或受损：过时或受损的抗体可能会导致高背景值。蛋白质降解：样品中蛋白质降解可能会导致高背景值。

3 回答466 围观

问酵母双杂酵母双杂转入ad/bd质粒（作为阴性对照）后二缺板可以生长，在四缺板上也可以生长，是什么原因呀

loveliufudan

如果酵母双杂转入了AD/BD质粒，但在二缺板和四缺板上均可以生长，可能是因为所使用的培养基不同或者酵母双杂的菌株具有一些非特异性交互作用，导致假阳性的结果。一般来说，在二缺和四缺培养基上，酵母双杂只有在正常表达被检测蛋白质的条件下才能生长。在二缺培养基上，只有酵母双杂在同时表达Leu2和Trp1基因才能生长。在四缺培养基上，只有酵母双杂在同时表达Leu2、Trp1、His3和Ade2基因才能生长。

3 回答4755 围观

问免疫共沉淀实验，用裂解液裂解细胞后的液体非常粘稠，离心后也非常粘稠，用2.5微升枪头也没办法吸取上清，怎么办？

loveliufudan

如果进行免疫共沉淀实验时，裂解液非常粘稠，可能是因为细胞裂解不彻底或者存在大量的DNA或RNA等高分子物质，导致样品粘稠。这种情况下，可以尝试以下几种方法：1.调整细胞裂解条件：可以尝试更改裂解液的pH值、NaCl浓度、甘油浓度、Triton X-100浓度、EDTA浓度等条件，以优化细胞裂解效果。如果使用冷冻切割法等机械方法裂解细胞，则需要对样品制备过程进行优化。2.增加离心时间或速度：可以将样

3 回答3419 围观

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