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科研学霸天团，48小时有问必答

问基于单链DNA构建的PROTAC靶向降解膜蛋白中，稀释单链DNA的培养基的血清浓度一般不要高于百分之多少

loveliufudan

一般来说，建议将血清浓度控制在1%以下。如果实验条件允许，可以将血清浓度降至0.1%或更低。需要注意的是，血清的成分非常复杂，包括多种蛋白质、脂质、激素、生长因子等，这些成分可能会与实验所需的蛋白质或DNA结合，从而影响实验结果。因此，在进行基于单链DNA构建的PROTAC实验时，应该根据实验需要和要求进行血清浓度的优化和控制，以获得最佳的实验结果。

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问HPLC和指纹图谱有什么具体的区别吗，它们检测样品的条件可以通用吗

loveliufudan

HPLC（高效液相色谱）和指纹图谱是两种不同的化学分析方法，其检测原理、应用范围和检测条件都有所不同。HPLC是一种常用的分离和纯化技术，它基于化学物质在流动相和固定相之间的差异进行分离，通常用于分离和检测化学物质的纯度、含量、结构和化学性质等。HPLC的检测条件需要根据样品的性质和要求进行优化和调整，如流动相的组成、流速、温度、压力等参数。指纹图谱是一种基于多成分分析的质量控制方法，它通过分析样

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问WB只能跑出来内参没有目的条带求助

z流沙z

这种情况一般可能考虑抗体种属的问题，确认一下一抗二抗的种属正确

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问双荧光素酶插入启动子之后荧光比空载低

dxy_s1v2ced7

“双荧光素酶实验荧光值异常，常见原因给你列几个方向： 1.启动子/载体因素：截短后的启动子活性弱，或者载体构建有干扰（比如启动子和空载序列重叠），都可能让荧光变低；也得检查质粒质量、转染条件是否一致～ 2.实验操作细节：荧光素没避光保存、裂解液处理不彻底，会影响信号；另外，荧光信号的采集检测也超关键！要是仪器的光电探测‘不给力’，微弱荧光抓不住，结果也会偏差～像滨松 PMT 这类高灵敏度组件，能

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问coip结果分析-救救孩子吧！！！

是TTT

这种结果没有意义60的位置可能是重链，110没有条带你需要排除以下原因:一.跑input排除蛋白没有降解。二.确认A抗体说明书可以用来做co-ip。三.co-ip全程需要冰上或者4℃。四.co-ip完成以后，蛋白洗脱步骤是否无误。五.co-ip实验除了需要有实验组，还应该设置对照组，对照组应为同种属的iGg抗体去拉

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问WB求助

balalaLy

200mA 1.5小时，如果是70以下的蛋白应该没问题的。如果你的蛋白分子量大，可能就是没有转过去。另外抗体的浓度和抗体稀释液需要调一下。

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问WB胶原指标跑不出来

sswei

样品浓度太低，建议将样品缓冲液冻干一部分，或者以超滤等方法，提高目的蛋白的浓度后，在进行电泳。

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问提取蛋白泡沫很多

huarenqiang5

可能是由于剧烈晃动了蛋白上清液产生的，对实验没什么影响。

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问泛素-蛋白酶体

loveliufudan

如果您想证明某药物通过泛素-蛋白酶体途径调控蛋白降解，您可以通过联合使用该药物和mg132等蛋白酶抑制剂，来验证该药物是否能够被蛋白酶体途径调控。一般来说，药物和蛋白酶抑制剂可以同时作用于细胞，或者先加入蛋白酶抑制剂，然后再加入药物，这可能取决于具体的实验条件和您的研究需求。以下是一种可能的联合用药方案：在细胞培养基中加入适量的mg132等蛋白酶抑制剂，用于抑制泛素-蛋白酶体途径的蛋白降解。在一定

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问WB显影整张膜都是黑的

dxy_xextz7w2

控制TBST的ph值在7.4左右可以改善大片黑的情况，但是如果改善不了可能是抗体的问题

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问wb条带分析|蛋白跑出泳道；条带显示不全

loveliufudan

电泳不均匀或者样品加载不均匀导致蛋白质跑出了浓缩胶范围，同时转膜也存在不均匀的问题，导致某些条带显示不完整或者缺失。此外，实验中也可能存在其他因素，如抗体浓度、蛋白质含量等问题，也有可能影响结果。

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问求助OX-LDL与LDL比较其电泳迁移率

loveliufudan

OX-LDL和LDL的电泳迁移率可能存在一定差异，因为OX-LDL经氧化后，脂质双层发生了结构改变，导致其电荷密度和分子大小发生变化，从而影响了其电泳迁移率。因此，建议您尝试调整电泳条件，优化实验流程，以更好地分离和检测LDL和OX-LDL。以下是一些可能有帮助的建议：优化琼脂糖凝胶浓度：您可以尝试增加琼脂糖凝胶的浓度，以提高分离效果和条带清晰度。一般情况下，0.8%的琼脂糖凝胶电泳可以分离LDL

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问求助wb内参条带问题

sswei

可能有转模不均匀，抗体特异性不高等原因

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问wb成这样是什么原因呀是蛋白样品上多了吗

sswei

存在蛋白样品上样量太多，存在交叉反应或抗体浓度太高等原因。

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问血管平滑肌细胞膜片钳实遇到的问题求助

loveliufudan

您遇到的问题可能是由于以下原因导致的：细胞质溶液中的Ca2+浓度过高：高浓度的Ca2+会刺激平滑肌细胞收缩，因此需要控制细胞内外液中的Ca2+浓度，确保在实验过程中细胞不会受到过多的刺激。钳制电压过大：过大的钳制电压也可能导致平滑肌细胞收缩，因此需要逐渐调整钳制电压，找到合适的电压范围。内外液渗透压差异过大：内外液渗透压差异过大也可能导致细胞收缩，因此需要逐渐调整内外液的渗透压差异，确保在实验过程

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问关于RAW264.7细胞一氧化氮检测的问题

loveliufudan

一氧化氮(NO)在细胞中的产生通常是通过一氧化氮合酶(NOS)的催化反应完成的。在RAW264.7细胞中，诱导NOS的剂量和时间是关键因素，过低或过高的剂量或时间都可能导致NO测不出来的问题。另外，如果您使用的是颜色反应法或化学发光法等方法来检测NO，需要注意的是这些方法对样品中NO的灵敏度和特异性都有一定的要求。例如，颜色反应法中，如果存在其他氧化物质或化学物质可以干扰反应体系，则可能导致NO无

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问感觉GM-CSF和IL-4诱导出来了巨噬

loveliufudan

可能是您诱导出了巨噬细胞。巨噬细胞在贴壁培养条件下容易形成集群，而且在细胞形态上与树突状细胞有所不同。您可以尝试使用其他方法（如细胞表面标记物、基因表达谱等）来确定这些细胞的类型。同时，为了避免因细胞的类型不确定而对实验结果造成影响，建议您进行相应的实验对照。

2 回答298 围观

问做WB时，小分子转膜时间怎么控制？

是TTT

普通Western转膜液200mA，一分钟转1kd，10-30kd转10-30分钟。小分子wb没有条带可能不在于转膜没成功，关键在电泳，可以调整下层胶浓度跑小分子蛋白

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问分离胶百分之15，浓缩胶选多大的呀，

此用户已注销

浓缩胶一般都是5%的,下面的是5ML的配方,其余的你可以自己算了5mlH2O 3.6acrylamide mix（30%） 0.621M Tris(PH6.8) 0.6310% SDS 0.0510% AP 0.05TEMED 0.005

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问检测TERT的表达，分子量不太对，有杂带带

loveliufudan

很可能是样品的质量不佳，如受到不适当的处理、冻存和解冻等，导致蛋白质降解或变性，所以产生了杂带。

3 回答286 围观

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