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        WB显影整张膜都是黑的

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        audreyhepburn

        这几次跑蛋白整张膜显影都是黑的,目的和内参actin都一样,不知道怎么回事,条件没有变化,和之前的一样,实在不知道哪里的原因了,重新提蛋白也是一样。

        电泳:浓缩胶80伏,20分钟,分离胶120伏1小时。

        转膜:300毫安,2小时

        封闭:5%脱脂奶粉1.5-2小时

        二抗:中杉金桥1:25000稀释

        洗膜:TBST,5分钟,5次图片描述

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        5 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        可能的原因:

        1.过量的抗体:使用过量的抗体可能会导致非特异性结合,从而导致高背景值。

        2.不当的洗膜条件:使用过于粗糙或过于缓慢的洗膜步骤可能会导致高背景值。

        3.抗体过时或受损:过时或受损的抗体可能会导致高背景值。

        4.蛋白质降解:样品中蛋白质降解可能会导致高背景值。

        5.膜过于湿润: 膜过于湿润可能会导致高背景值6.检测抗体非特异性结合: 如果检测的抗体不是特异的,可能会有非特异性结合导致黑色背景。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        第一可能封闭不彻底;第二可能TBST/PBST洗膜不完全。

        user-title

        dxy_xextz7w2

        有帮助

        控制TBST的ph值在7.4左右可以改善大片黑的情况,但是如果改善不了可能是抗体的问题

        user-title

        努力的人更幸运

        有帮助

        可能是封闭效果不好 脱脂奶粉容易结块 不可太多次重复利用

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        可能是蛋白降解了,或者是TBST的ph值太高影响抗原抗体结合

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