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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
如何确定WB蛋白的上样量
sswei
wb蛋白上样量一般在20ug到50ug之间,但具体上样量要根据目标蛋白的表达量来确定。
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问
求助RAW264.7诱导M2的问题
土井挞克树
可以2.5ng/ml IFN-γ+200ng/ml LPS 共同作用12h
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问
求助棕榈酸溶解问题
xb00071425
有个小问题,棕榈酸溶解加氢氧化钠,那很可能会变成棕榈酸钠?还不如直接溶解棕榈酸钠?
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问
求助THP1用PMA诱导M0
dxyc42u
跟诱导前细胞状态有很大关系,建议用状态好的细胞诱导
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问
怎样检测受体活性
loveliufudan
确定受体活性的最优剂量通常需要进行一系列实验和测定。以下是一些常见的方法和实验设计,可用于评估受体活性并确定最佳剂量:1. 结合测定法(Binding Assays): - 结合测定法可用于评估受体与其配体之间的亲和力和结合能力。常用的方法包括放射性配体结合测定(Radioligand Binding Assay)和荧光标记配体结合测定(Fluorescence-labeled Ligand
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问
求助,如何向小鼠血管壁注射药物
土井挞克树
可以使用微量注射器向血管壁注射药物
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问
WB条带模糊,这是啥原因呀
dxyc42u
可以增加一下曝光时间试一试吧。
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问
验证自激活,在二缺、三缺上生长,在四缺上不生长,可以说没有自激活吗
loveliufudan
如果在二缺和三缺上有生长,而在四缺上没有生长,那么可以推断在四缺中存在某种必需的成分或条件,而该成分或条件对自激活起到了抑制作用。因此,不能说完全没有自激活,而是在四缺条件下的自激活被抑制了。这种情况可能是由于四缺条件下的环境变化或特定抑制机制的存在。请注意,这只是根据描述的信息所做的推断,具体情况可能需要更多的实验数据和分析来得出准确的结论。
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问
我想请问有没有人做过六孔板铺板T细胞呀,最大可以铺多少呀
sswei
正常情况下,六孔板的每个孔长满可以有100万个细胞,所以每个孔可以养80万细胞。
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问
病毒感染细胞,药物在有抗病毒作用下,如何证明其对炎症机制的直接作用?
土井挞克树
建议增加对照组,对照组不加药物直接验证抗炎作用
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问
分离血浆后接着分离pbmc
土井挞克树
1500r,时间设置为3-5min
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问
wb条带浅是怎么回事
来一起探讨
蛋白出现反复冻融,会对结果产生影响。在后续实验可以将煮好的样品先分装,每个离心管里装每次实验所需要的量,减少反复冻融,在-80℃可较长时间保存。
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问
细胞抗氧化酶活SOD、CAT
土井挞克树
有可能出现的,比如损伤组损伤过度就会出现这种情况
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问
内参不齐该如何调整上样量,使用Image Lab吗?
土井挞克树
内参跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。调整上样量可以使用image la b
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问
Western Blot电泳
土井挞克树
考虑是胶的问题,分离胶浓度太低可能会造成弥散
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问
请问做透析袋试验,怎样能做到最好的密封,用棉线扎和用透析袋夹哪个更好?
sswei
用透析袋试验,用透析袋夹密封更好。
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问
磷酸化的p-PI3K条带好淡,怎么才能跑出好的条带呢?
sswei
因为磷酸化蛋白只占总蛋白量的极少部分,加入一抗后最好4℃过夜,保证抗体有充分的结合时间。4℃也可以使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化抗体都挺贵的。二抗则室温1h即可。4℃过夜,主要原因不是使抗体结合更好,而是蛋白抗原不容易从膜上脱落。蛋白抗原在膜上靠的是物理吸附属热力学范畴,高温下容易脱落。磷酸化蛋白WB时,用洗涤液漂洗时也要注意一下,摇床的转速不要太快,洗的时间不要太长,孵育一抗和二抗之后分别洗3次
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问
SPR实验,蛋白相互作用
是TTT
含量比较多的话透析的话比较好,以免影响最终结果
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问
合理吗?原理和流程都懂,Co-IP做不出来!
是TTT
用好一点的琼脂糖珠子,用ip级的抗体,孵育在4℃,如果这三点都做到了,还做不出来,估计是相互作用是瞬时的,太快了导致co-ip捕捉不到,此时需要换别的手段检测,例如邻位连接
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问
核酸检测试剂常温保存时间是多少?
是TTT
未拆封前是18个月,但是如果天气较热,超过了30℃,保质期会缩短
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