Western Blot电泳

考虑是胶的问题，分离胶浓度太低可能会造成弥散

样品在电泳过程中出现弥散的样子可能是由于以下几个原因：

1. 过量的样品：如果在泳道中加载了过多的样品，这些样品在电泳过程中可能会扩散到相邻的区域，导致泳道中出现弥散的样子。

2. 蛋白质聚合物形成：某些蛋白质在电泳过程中可能会形成聚合物，这些聚合物可能会导致泳道中的样品出现弥散的形态。

3. 转膜不完全：转膜过程中，如果转膜条件（如电流和时间）不合适或者转膜装置存在问题，可能会导致样品在转膜过程中没有完全转移到膜上，从而出现弥散的样子。根据您提供的信息，转膜条件为300mA转膜30分钟，这是常见的条件之一，但仍需确保蛋白质能够充分转移到膜上。

至于膜上marker颜色浅的问题，颜色浅可能是由以下几个原因导致：

1. 转膜不完全：如果转膜过程中转移到膜上的marker数量较少或者转膜时间不足，可能导致marker在膜上的颜色较浅。

2. Marker浓度过低：如果marker的浓度过低，即使转膜完全，膜上marker的颜色也可能较浅。您可以尝试增加marker的浓度来解决这个问题。

综上所述，出现弥散的样子可能是由于过量样品或蛋白质聚合物形成，而膜上marker颜色浅可能是由于转膜不完全或marker浓度过低。建议您重新评估加载样品的量、优化电泳条件和转膜条件，以及调整marker的浓度，以获得更好的结果。

你的loading不行，可以试一下添加b巯基乙醇，这样蛋白会浓缩得比较好。PVDF膜不存在转过的说法。