丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

磷酸化的p-PI3K条带好淡,怎么才能跑出好的条带呢?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

user-title

清雨忆江南


wx-share
分享

3 个回答

user-title

sswei

有帮助

因为磷酸化蛋白只占总蛋白量的极少部分,加入一抗后最好4℃过夜,保证抗体有充分的结合时间。4℃也可以使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化抗体都挺贵的。二抗则室温1h即可。4℃过夜,主要原因不是使抗体结合更好,而是蛋白抗原不容易从膜上脱落。蛋白抗原在膜上靠的是物理吸附属热力学范畴,高温下容易脱落。

磷酸化蛋白WB时,用洗涤液漂洗时也要注意一下,摇床的转速不要太快,洗的时间不要太长,孵育一抗和二抗之后分别洗3次,每次5min即可。宁愿深一些,总比做不出来强得多。另外,洗的时候,最好不要把几张膜叠在一起洗。

user-title

土井挞克树

有帮助

条带淡的话建议增加上样量,可以获得美观的条带

user-title

balalaLy

有帮助

条带淡可能是本身表达就低,可以适当增加蛋白上样量。

ad image
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序