实验问答22,050,418 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问中药石见穿用HPLc法测量时，选取的对照标准品可以是什么

huarenqiang5

你可以选取对照标准品丹酚酸B。

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问二抗anti-mouse可以代替anti-rat吗？

loveliufudan

使用鼠源二抗代替大鼠源二抗进行Western blot或免疫荧光实验,原理上是可行的,但会有一定影响和需要注意的地方:1. 特异性会降低。鼠二抗与大鼠一抗的亲和力和特异性不如对应的大鼠二抗,可能会出现杂交反应,导致背景升高和目标蛋白信号降低。2. 灵敏度可能会降低。如果鼠二抗与大鼠一抗的亲和力较低,会导致目标蛋白的检测灵敏度降低。3. 需要选择高交叉反应性的鼠二抗。一些商家会指出二抗与其他物种一抗

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问正常使用的电泳槽为什么会裂开

麻黄连翘赤小豆

摔的，一般电泳不会影响电泳槽，除非质量太差

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问大鼠脑组织FTO好跑吗？我为什么用超敏显影还需要5分钟？还巨丑无比。求救！！！

汤姆卜丽波

你可以发一下你的条带，如果可以发出来光，只是条带不齐或者背景杂乱那就要适当调整封闭的时间，每次洗涤的时候充分洗涤

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问微量法和分光光度计法我应该选择哪种？

sswei

MDA检测试剂盒应选用分光光度计法。

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问丙二醛MDA检测试剂盒（TBA法），属于ELISA.试剂盒吗？为什么啊

静心观照

不属于ELISA试剂盒。丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法，MDA Assay Kit)，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA进行定量检测，广泛用于脂质氧化水平检测。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应形成红色的MDA-TBA加合物，MD

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问液相实验中的精密度考察，稳定性考察，加样回收率考察中的RSD值分别在多少范围内才有效

dxy_awdr7ak5

精密度试验是用来评估仪器的稳定性和重复性的重要指标之一。在进行精密度试验时，一般会采用标准品进行多次测试，并计算其相对标准偏差（RSD）。根据实验设计和实验条件的不同，RSD值的范围可能会有所不同。一般来说，RSD值应该在1%以下，通常在0.1%到0.5%之间。如果RSD值超过1%，可能意味着实验条件不够稳定或者仪器存在一些问题，需要进一步检查和调整。需要注意的是，RSD值只是精密度试验的一个指标

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问提的拟南芥蛋白为啥一直杂不出actin,蛋白跑胶染色都是正常的呀

dxy_mqg1dtg8

有以下可能原因导致拟南芥蛋白无法杂交出actin：1.技术问题：可能是实验过程中存在技术操作不当的问题，如蛋白提取、电泳、转印等步骤出现错误，影响了actin蛋白的检测或识别。2.蛋白质稳定性：actin是一种结构稳定的蛋白，其在细胞中具有高度保守性。但是在某些情况下，actin蛋白可能会受到降解酶的作用，导致其在蛋白提取和检测过程中被降解，从而无法被检测到。3.拟南芥基因调控：在拟南芥中，蛋白质

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问WB疑问

晓雨知春来

电泳速度不一致，查看下面电丝是不是顺畅。

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问请问下各位老师，wb结果一边粗一边浅可能是哪些原因呢

loveliufudan

可能由以下原因引起： 1. 不均匀的负载：在进行蛋白负载时，如果样品在凝胶上分布不均匀，可能导致一侧的蛋白负载较高，而另一侧较低。这会导致一侧的蛋白条带更粗更浓，而另一侧则较为淡薄。 2. 不均匀的电泳条件：在进行电泳过程中，如果电流分布不均匀或电场强度不稳定，也可能导致一侧的蛋白条带较为粗暗，而另一侧较为模糊或浅。 3. 不均匀的转移：在进行半湿式转移或湿式转移时，如果蛋白质的转移效率不均匀，可

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问原核表达，加不加IPTG都能表达

loveliufudan

在您进行原核表达时，有一些可能的原因导致您无论是否添加IPTG都能观察到目标蛋白条带的出现： 1. 自发性诱导：有些表达载体或宿主菌株在特定条件下可以自发表达目标蛋白，而不需要外源性诱导剂如IPTG。这可能是导致您观察到目标蛋白条带的原因之一。这种自发性表达可能是由于一些突变或其他因素导致的。 2. 泄漏表达：宿主菌中的T7 RNA聚合酶可能存在泄漏表达的现象，即在未添加IPTG的情况下，T7 R

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问组织ELISA实验可以用RIPA裂解液吗？还是匀浆就够了？

balalaLy

根据说明书的要求，如果匀浆检测不到，可以选择一些不干扰Elisa结果的裂解液进行裂解，或者超声。

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问组织和细胞跑WB匀浆后需要加裂解液～为什么组织做ELISA 做匀浆即可？匀浆能提取蛋白吗

loveliufudan

对于细胞和组织的蛋白提取，常用的方法是使用裂解液。裂解液中含有蛋白酶抑制剂和蛋白分解酶，可以破坏细胞和组织的结构，释放出蛋白质。对于细胞，裂解液的使用可以有效破坏细胞膜和细胞器，并释放细胞内的蛋白质。裂解液中的蛋白酶抑制剂可以防止蛋白质的降解，保持其完整性。而对于组织，裂解液同样可以破坏组织结构，释放细胞内的蛋白质。组织的匀浆操作主要是将组织打碎，增加表面积，以便裂解液更好地与组织接触，促进蛋白质

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问求助！TGF- beta 刺激HUVEC细胞构建纤维化模型，细胞种6孔板的密度该是多少呢？

huarenqiang5

细胞密度5×10^6~1×10^7/mL。

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问求大佬们分享一份THP1诱导巨噬细胞极化CD86和CD206流式双染protocol！

loveliufudan

以下是一份常用的THP-1细胞诱导巨噬细胞极化并进行CD86和CD206的流式双染的实验方案：材料： • THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞系） • RPMI 1640培养基（含10% FBS和1% 抗生素/抗真菌剂） • Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) • 无血清RPMI 1640培养基 • 流式细胞仪染色缓冲液（例如PBS或FACS缓冲液） • 非

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问脂肪组织单细胞悬液制备

huarenqiang5

按以下几点建议来提高细胞获得率: 1)将获取的脂肪组织清洗后剪碎，加入1~2倍体积的消化酶进行消化; 2)第一次消化结束后对步骤1)所得的组织悬液进行离心，抽取下层消化液和细胞的混悬液，加入等体积的终止液中和消化酶的作用，得到悬液a，上层夫消化的组织块继续加入1~2倍体积的消化酶对组织块进行第二次的消化; 3)在第二次消化后，将未完全消化的组织块，第二次

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问请问融合成功了吗第五天

feixue7758527w

我觉得已经是融合成功了，因为已经聚集了。

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问含GFP标签菌诱导前变绿

晓雨知春来

有可能是细菌污染了，你可以进行无菌实验和分析以确认是否存在背景杂菌。

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问一般情况下，WB实验中提取的蛋白是不是总蛋白？是否包括细胞核蛋白、膜蛋白？

feixue7758527w

是的，一般情况下WB提取的蛋白是总蛋白的，当然也有特殊的提取蛋白办法，可以提取特定蛋白的。

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问eLISA实验，每个指标的酶标板能通用吗？

loveliufudan

对于elisa实验，每个指标的酶标板通常是专门设计和涂层的，以适应特定的检测目标。酶标板是用于捕获和检测特定分子（如蛋白质、抗体等）的固相平台。不同的指标通常需要使用不同的酶标板，这是因为每个指标具有不同的特性和特定的检测需求。酶标板的涂层物质、结构和特性需要与待检测分子相匹配，以实现高灵敏度和特异性。因此，通常情况下，每个指标都需要使用专门设计的酶标板，以确保准确和可靠的检测结果。在实验中，根据

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