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        脂肪组织单细胞悬液制备

        相关实验:脂肪组织和细胞的总蛋白提取

        user-title

        妥欢LZs

        用的sigma的I型胶原酶,37度,180rpm,消化30min,细胞得率非常低,想请问有没有大佬知道如何制备

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        2 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        按以下几点建议来提高细胞获得率:

        1)将获取的脂肪组织清洗后剪碎,加入1~2倍体积的消化酶进行消化;

        2)第一次消化结束后对步骤1)所得的组织悬液进行离心,抽取下层消化液和细胞的混悬液,加入等体积的终止液中和消化酶的作用,得到悬液a,上层夫消化的组织块继续加入1~2倍体积的消化酶对组织块进行第二次的消化;

        3)在第二次消化后,将未完全消化的组织

        块,第二次消化所得的消化液和细胞的混悬液,以及悬液a,全部加入放置了细胞筛网的培养皿中,进行手工柔和研磨,吸取研麽后的细胞悬液,加入等体积的终止液。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        下面是一些可能有助于提高脂肪组织单细胞悬液制备的建议:

        1. 脂肪组织预处理:在开始消化之前,确保脂肪组织样本经过适当的预处理。这包括去除周围的结缔组织和血管,并尽量去除可见的血液。

        2. 酶消化条件优化:消化条件是关键因素之一。您可以尝试优化消化时间和消化酶的浓度。对于L型胶原酶,您可以尝试不同的消化时间(例如15分钟、30分钟、60分钟)和酶浓度,以找到最适合您的样品的条件。

        3. 细胞分散:在消化结束后,进行细胞分散以制备单细胞悬液。轻轻振荡或轻柔离心来帮助分散细胞,避免过度机械刺激。

        4. 过滤:使用细胞筛或滤网(例如70μm或100μm)过滤细胞悬液以去除大块组织碎片。

        5. 细胞沉降:将过滤后的细胞悬液放置在离心管中,进行适当的离心以促进细胞沉降和去除上清液。

        6. 细胞计数和质量评估:使用显微镜和细胞计数仪等工具对细胞进行计数,并评估细胞的质量和完整性。

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