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实验问答23,371,714 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问为什么跑完蛋白总是靠近浓缩胶这一半胶脱不了色

huarenqiang5

考虑胶的浓度过高，建议降低浓度。

4 回答910 围观

问组织蛋白酶酶切趋化因子实验步骤怎么做啊？？大家

周末也要努力呀

组织蛋白酶酶切趋化因子实验一般分为以下几个步骤：1. 提取趋化因子：从细胞培养上清液或组织中提取趋化因子。2. 纯化趋化因子：通过某些分离纯化技术，如离子交换层析、凝胶过滤层析等，将趋化因子纯化。3. 制备底物：制备含有趋化因子底物的凝胶，如聚丙烯酰胺凝胶。4. 酶切实验：将纯化的组织蛋白酶加入含有趋化因子的凝胶中，进行酶切反应。反应后，观察凝胶中的趋化因子是否被酶切分解，从而判断组织蛋白酶对趋化

4 回答660 围观

问为啥我的co-ip阴性对照有条带呢？

龙大人驾到

如果在共免疫沉淀（Co-IP）的阴性对照组中观察到条带，可能存在非特异性结合的情况。这种非特异性结合可能是由于实验条件、试剂或样品中其他成分引起的。以下是一些处理非特异性结合的常见方法：1. 优化实验条件：确保使用正确的缓冲液、温度和pH值等实验条件。适当的优化可以减少非特异性结合。2. 阻断剂：添加合适的阻断剂可以降低非特异性结合。常用的阻断剂包括非特异性蛋白质（如牛血清蛋白、鱼胶等）或非特异性

3 回答2921 围观

问Elisa实验做完，吸光度太高，一般是什么原因呢？

dxy_xextz7w2

有可能是试剂和样品没有混合均匀

5 回答1161 围观

问岛津的nsmol试剂盒对单抗进行酶解并富集后，可以直接进质谱吗？

土井挞克树

可以直接进质谱的，这个试剂盒效果不错

4 回答271 围观

问组织切片免疫荧光的表达量是看亮度还是看染色密度的？

huarenqiang5

组织切片免疫荧光的表达量一般情况下是看亮度，而不是看染色密度。

3 回答352 围观

问两个组别的同一目的条带在wb中位置不同（内参齐平）

科研小dog

两个组别，是细胞不同还是组织来源不一样呢？相同蛋白在不同类型细胞和组织，受到不同修饰或者是其他原因的影响，有可能分子大小是会不一样的，这就会导致目的条带不在同一个位置上。

3 回答1253 围观

问为什么全菌的蛋白条带总是糊成一片，不是清晰的条带？而且诱导的蛋白和纯化蛋白条带不一致是怎么回事，一个是纯化蛋白，一个是诱导后全菌

huarenqiang5

主要考虑可能是上样量过多或样品弥散导致。

3 回答432 围观

问鉴定到的蛋白与凝胶电泳图谱中估测分子量差异很大的原因？或者为什么SDS-PAGE胶上不同位条带的质谱鉴定结果中含有同一个蛋白？

huarenqiang5

由于体内或者体外因素，导致同一蛋白存在不同形式的修饰、剪切或者降解，从而形成凝胶电泳图中能够看到的存在差异分子量的蛋白条带。然而这些蛋白在质谱鉴定时会同时指向数据库中同一个、全长的、无修饰的蛋白理论序列。因此会出现凝胶电泳图中的蛋白分子量（实际分子量）与鉴定的蛋白分子量（理论分子量）不同的情况。

4 回答782 围观

问蛋白质胶总是凝的很慢，凝的不好怎么回事

高山云初

过硫酸铵一定要现用现配,时间久了就会造成不凝.这是最常见的不凝的原因

5 回答1834 围观

问如果skyline锁定的所有离子对均不出峰，该怎么锁定目标离子对？

高山云初

在碰到样品没有出峰的情况，首先考虑是否是因进样浓度太小，运行时间不够，仪器和色谱柱故障，样品是否降解变质，检测器（检测波长）的选择是否准确等问题导致的。如果排除上述问题，样品仍未出峰，则很有可能是样品在固定相上保留太强，这样可以先调整流动相的洗脱能力，增强对化合物的洗脱，或者更换更合适的固定相，如反相C18换成碳载量低一些的C18或者短碳链的反相柱如C8等。

3 回答413 围观

问ELISA实验和液质联用法（LC-MS）相比，有何优缺点？

高山云初

缺点：1、重复性不好；2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。

3 回答2257 围观

问高效液相色谱用于分离酶解后的蛋白，还需要纯化吗？

sswei

高效液相色谱用于分离酶解后的蛋白，还需要纯化

3 回答314 围观

问请问对于新上市的多肽类药物，如何在skyline软件上寻找可能性较大的离子对？如何筛选出较少的目标离子对，用质谱MRM通道监测？

dxy_mqg1dtg8

对于新上市的多肽类药物，建议首先进行文献调研，了解该药物的化学结构、氨基酸序列和药代动力学等信息。根据该信息，可以使用Skyline软件构建出该药物的离子对库，包括预测的前体离子和碎片离子。在构建离子对库时，可以考虑以下几个方面：1. 根据氨基酸序列预测可能的碎片离子，包括b离子、y离子、a离子、x离子等。2. 针对药物的特殊结构，预测相关的碎片离子，如磷酸化、甲基化、乙酰化等修饰的碎片离子。3.

3 回答515 围观

问大小分子蛋白各自的电泳胶浓度如何选择？蛋白marker大分子条带降解原因？蛋白样本跑胶时出现笑脸条带什么原因？

高山云初

微笑是因为你灌胶的时候冷却不均匀,中间部分冷却不好,导致凝胶中的分子有不同的迁移率所致

4 回答666 围观

问蛋白组学如何快速建立方法？如果给第三方公司做，成本很高。但是自己做建立方法又很难很慢，如何解决这两者之间的矛盾？

huarenqiang5

你可以先借鉴一下这篇文章，《蛋白质组学研究的基本步骤》。然后决定是给第三方公司做还是自己建立。

4 回答275 围观

问电泳时样品没有溢出到其他泳道，胶进行考马斯亮蓝染色后，各个泳道蛋白都连在一起了，而且泳道越来越宽，为什么呢？

balalaLy

上样量太大了，蛋白向两边溢了。

3 回答547 围观

问请问诸位老师，定量蛋白质组学的抗病毒天然免疫通路蛋白泛素化研究，最近有什么新的学科进展？谢谢

huarenqiang5

研究新进展，可以看一下这篇文章《Tankyrases inhibit innate antiviral response by PARylating VISA/MAVS and priming it for RNF146-mediated ubiquitination and degradation》，该研究使用生化纯化方法，首次发现VISA能够被Tankyrase 1 (TNKS1，PARP5a

3 回答339 围观

问大肠杆菌中菌上清液中高效液相色谱测天冬酰胺的含量

sswei

1)．先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，般为有机系和水系，常用的孔径为0.20um和0.45um。2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)．正常情况下，仪器先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂，则要次重蒸水冲洗10-20分钟，直至色谱柱中有机相冲净为止) 。4)．般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，重要的是仪器基线走

2 回答518 围观

问跑SASPAGE胶，发现条带比预测大小大20kDa，目的条带10kda

静心观照

1.确定蛋白是内源的还是外源的，如果是外源蛋白是不是全长序列;2.SWISSPROT 数据库查询该蛋白是否有其他isoform ;3.SWISSPROT 和文献查询蛋白质是否有剪切活化，剪切活化造成蛋白变小;4.确定蛋白质是否是二聚体或多聚体5.NCBI和SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰，如有修饰会导致蛋白质增大如果除了上述 5条，还是没找到问题在哪里，那就回过头看看是不是预测不准或

5 回答718 围观

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