3 个回答
科研小dog
有帮助
两个组别，是细胞不同还是组织来源不一样呢？相同蛋白在不同类型细胞和组织，受到不同修饰或者是其他原因的影响，有可能分子大小是会不一样的，这就会导致目的条带不在同一个位置上。
周末也要努力呀
有帮助
蛋白量不一样，最好使用loading补齐体积
高山云初
有帮助
1）二抗的非特异性结合
增加一个对照：不加一抗，其他操作过程不变，即可验证背景是否由二抗系统来源。选择其他二抗（特异性更强的，只针对重链的）。
（2）一抗的特异性不够
使用单克隆或者亲和纯化的抗体，保证抗体的特异性。
（3）蛋白降解
使用新鲜制备的标本，并使用蛋白酶抑制剂。
（4）二聚体或多聚体存在
增加蛋白质变性过程及强度。
（5）抗体浓度过高
降低抗体（一抗、二抗）浓度，可以减少非特异性条带。
（6）蛋白上样量过大降低上样量。
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