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科研学霸天团,48小时有问必答
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如何可以调齐内参,总是调不齐,有什么好方法吗?
n0y0j7
首先测浓度测准,然后每次实验条件一样,包括电压电流,用的夹子,滤纸张数,等。
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问
从超声纯化的蛋白怎么保存,可以放在负二十吗,可以放多久,如果制成wb的上样品,需要怎么保存?
天一湖医者
可以。1. 短期保存(24 小时内)大多数的蛋白质可以保存在 4°C。2. 在 4°C 超过 24 小时 需要考虑对蛋白样品灭菌过滤(使用 0.22 µm 过滤器),或者加入抑菌剂(例如 0.1% 叠氮化钠)以避免细菌生长。值得注意的是,并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。3. 长期保存(一周以上)需要将蛋白样品冻存。
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问
关于WB电泳的若干疑问
Eason老歌迷
第一个问题,我用过预制胶和自己配的胶,我个人还是更喜欢用自己配的,感觉效果更好,当然前提是你一定要混匀。第二个问题,小蛋白在转膜时一定要注意控制时间。一般湿转半个小时即可。
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问
wb中的磷酸化蛋白要怎么跑,有没有什么特殊技巧,能跑的好看
秋秋欣欣
磷酸化的蛋白封闭的时候最好用5%BSA
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问
同一个细胞系提蛋白以后敷抗体显影显出背景很深,条带很杂……
Eason老歌迷
一个是你的封闭时间太短了。二个是你的抗体浓度过高。三个是你的有非特异性条带了,抗体特异性不高
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问
各位大佬wb条带宽窄不一样什么原因
林夕娜娜
胶的问题,没有凝好,或者是没有混匀
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问
请问各位大神,磷酸化pi3k(分子量85)跑出来泳道背景很深
bamboopiggy
你试试用5%的脱脂牛奶封闭看看,可能会好一些
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问
求助 周围感觉神经上的神经树突标志物
dxy_gwrp7ndq
神经元树突标志物 SAP102。
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问
用本源抗体时,如果杂带特别多,主带又不特别浓,怎么确认目的条带?根据大小盲猜的么?如果那个位置靠近的上下也都有条带呢?
Eason老歌迷
大部分抗体的检测结果与理论分子量比较相近,检测结果误差在10-15%以内都可以认为是正确条带。
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问
请教,蛋白条带出现杂带,是抗体
Eason老歌迷
可能是你的抗体特异性不高。你的蛋白有没有降解,你的目的蛋白会不会形成二聚体。封闭时间是不是太短。
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问
Wb跑出来的条带背景很深,杂带很多的原因?
养点鱼吃火锅
3方面原因1.一抗浓度太高或抗体不好2.封闭不完全,时间不够3.洗脱时间次数不够。
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问
我今天跑wb,配制错误比例的电泳液影响实验结果吗?
秋秋欣欣
会有一定的影响,但是可能也能跑出来
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问
为什么跑的wb总是有杂带?还有黑点
balalaLy
留意一下你的目的条带的正确位置,说明书上的不一定是正确的,从这张膜上看可能是最下面那条,下次把膜剪宽一点,降低一下抗体浓度,洗膜时间可以稍长一点
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问
wb大佬帮我看看,我这膜怎么跑成这样了?
balalaLy
可以确定你的目的条带是中间那条淡的还是底下边边那条,如果是中间那条,就把边边那个位置切掉重新显影
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问
为什么我跑了几次lc3蛋白,显影总是白膜一张?
bamboopiggy
lc3大概在17kd左右,您最好用15%的胶来跑,转膜时间控制在400mA,1小时就可以。
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问
WB曝光时间偏长(10分钟以上),曝光出的条带有几条,理论上正确位置和不应该出现的位置都有条带,结果可以用嘛?
Dfcaizjm
感觉你这个时间太长了,我们一般一条带就3分钟左右,建议你缩短一下曝光时间
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问
好久没有科研了,问个小白问题,wb抗体哪家比较好的?一抗二抗,准备实验的。
养点鱼吃火锅
一般还是选择进口品牌,写到文章里受认可度更高,也不是说国产抗体都不好,也有质优价廉的国产抗体。进口品牌比如abcam,CST,thermo等。进口的也有可能效果不好,需要试一下。
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问
做WB时,抗体非特异性结合,与哪些因素有关?
Eason老歌迷
一个是抗体浓度问题。一个是抗体和fc受体结合。
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问
westernblot为什么条带有尾影 怎么处理?
Eason老歌迷
可能是你的一抗浓度太高了,你把一抗浓度稀释完在看。
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问
跑蛋白最后显影的时候膜上有一些斑点,不是很干净是为什么?怎么解决?
Eason老歌迷
你配置封闭液的时候,取上清,别取沉淀。还有就是封闭时间稍微延长。还有你的抗体浓度也可以稀释来看看
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