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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
链霉菌做荧光定量 PCR能不能以基因组做模板?
汤姆卜丽波
可以做模板,这个问题应该是引物特异性不高才会出现
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问
实时定量PCR的一个小问题?
未来9
SYBR GreenⅠ较另EvaGreen的标准曲线误差较大,且样品间分散度也较大。在定量PCR中饱和染料EvaGreen的定量效果好于SYBR GreenⅠ。
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问
PCR引物如何看是否容易形成引物二聚体?
月下扣动板机
1这条亮带如果在100bp一下就可以考虑是引物二聚体了,形成引物二聚体的原因很多,如引物设计的不好,在两端容易形成回文结构或是两条引物之间也可能会互补配对;退火温度没有达到最佳,实在不行就做个温度梯度吧;再就是试着改变一下循环数,也许会有帮助。
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问
想问一下pcr扩增后,5ul跑胶出现单一条带,剩下的不进行切胶回收,直接送去测序可以吗?
bamboopiggy
可以,我都是这么干的,测序公司会切胶回收的
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问
核酸扩增出现不规则曲线是什么原因?
师医生说
从人,机,料,法,环找下原因:操作流程是否正确,加样孔有无异常,加样中有无气泡干扰,电压是否稳定。该批次重新实验。
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问
核酸空白体系出现翘尾该怎么处理?
bamboopiggy
看是不是这个孔有问题,或者是你污染了?
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问
求助PCR条带问题?
dxy_2cic6tye
用的多大浓度的胶?目的片段大的话,胶浓度应该低。另对照样本跑的怎么样?marker图谱是否正常
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问
多重PCR可以分开做吗?十六对引物就做十六孔,都是同一次逆转的cDNA,然后一起扩增
balalaLy
如果是要样品或者组别之间进行比较最好一起做或者至少每次做都有可以相互比较的组别。
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问
qPCR部分扩增条带不显示cp值?
汤姆卜丽波
可能是加样问题或者八联管出了问题
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问
荧光定量PCR的mix是否可用于数字PCR反应体系?
帝尊
不可以的,酶的参与种类不同,未必适用。
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问
新冠病毒核酸检测质控品怎么稀释浓度
亦书甜恬
目前国内新冠质控品都是非定值质控品,按非医疗器械管理。所给的不同水平量值有单位水平也有数值,只能当做参考。根据你的试剂检测下限200copies/ml,那要得到的靶浓度应该是300-600,考虑到操作方便性,日常工作使用时直接按2.5倍稀释为宜,得到靶浓度为556copies/ml。检测时核酸提取加样量通常为200ml,实际稀释操作80ml质控品原液+120ml稀释液即可。以上供参考。
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问
PCR问题,求助一下?
bamboopiggy
先确定你的primer正确,然后试着降低annealing temperature试试
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问
qPCR实验内参基因CT值问题?
慈悲为怀医德为镜
内参一般15-20之间比较可信。
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问
多重PCR条带问题?
bamboopiggy
非特异性产物?条带大,是不是因为模板量大啊?
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问
公司定的pcr引物如何验证是否合适?
丁香清香
可以用于正式实验的引物必须满足以下条件:a溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时PCR产物在100bp一下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50b
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问
PCR求助赐教
帝尊
勤换枪头,严格按操作流程操作,及时保养。
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问
怎么用qpcr来检测病毒的滴度呢,样品是293t细胞产生的病毒,需要怎么处理吗?
汤姆卜丽波
通过在载体的长末端重复序列区(LTR)设计定量引物,利用荧光实时定量PCR测定重组慢病毒中LTR拷贝数来测定病毒颗粒数和有效感染的病毒颗粒,通过慢病毒颗粒数与实际有活力病毒滴度的比较,可以计算得到重组慢病毒感染效率.
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问
qpcr的引物应该有什么网站或者工具可以检查它的扩增效率吗?每次设计的都不太好用
balalaLy
引物设计的软件在设计过程中就有引物质量的评价反馈,也可以到pubmed上blast一下
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问
384孔板,rt-qpcr实验结果的处理?
balalaLy
跟96孔板的处理一样啊,只是工作量大了而已
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问
为什么细菌的16s用KOD酶有时候跑不出来,同样的条件taq酶可以呢
bamboopiggy
kod是高保真的酶,不会产生错配,但是效率有点低,taq酶保真性差,但是扩增能力强。
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