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        qPCR实验内参基因CT值问题?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        心细北方

        用HepG2细胞做的PCR实验,选择GAPDH为内参基因。内参基因做出来的结果在31左右。这个值感觉对于内参基因是不是太高了?

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        9 个回答

        user-title

        实验顺利_LilyZ

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        太大了,提rna的时候看下你的纯度,是不是有些污染;或者是引物不对,换引物试试

        user-title

        慈悲为怀医德为镜

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        内参一般15-20之间比较可信。

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        bamboopiggy

        有帮助

        是,内参一般15-25之间比较合适。你这个太大了

        user-title

        天一湖医者

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        是有点高,一般建议15-25之间。

        user-title

        balalaLy

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        gapdh一般在15左右,20几都不可信了

        user-title

        Eason老歌迷

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        一般理想的内参就会有这样几个条件,表达量较大;稳定表达于不同类型的细胞和组织;表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;不受任何内源性或外源性因素的影响;不存在假基因,以避免基因组 DNA 的污染扩增。一般用的是b actin,gapdh,18srna。我感觉你这个确实不合适

        user-title

        汤姆卜丽波

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        是有点高,这么高的内参值你的目的基因是多少?有可能是你的模板有降解

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        丁香清香

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        可能原因:

        1,内参引物效果不佳:可能原因是引物设计存在问题,比如存在引物二聚体等;另外,也有可能是引物使用时间过久或者保存不当,出现了降解。

        2,RNA质量不好,比如260/280, 260/230值偏低;

        3,反转时RNA含量过低;我们反转20uL体系一般用1ug RNA;

        4,定量时cDNA以及引物含量偏低;

        user-title

        秋秋欣欣

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        是的,太高了,一般15-20合适

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