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pcr实验加样走位问题
麻黄连翘赤小豆
加样看你怎么安排的样本,有几个样本,准备多少复孔合适,没有固定的走位,横着竖着都行,加准就行
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问
PCR八连管可以用记号笔做记号吗
麻黄连翘赤小豆
八连管本来就有标记,避免荧光问题,你可以拍照,或者画图在记录本上进行标记
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问
用trizol提组织rna,匀浆后trizol变成红褐色,并且离心之后没出现上层清液是怎么回事
whilt-shirt
trizol加完后要加氯仿振荡后离心才会有上层清液
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问
qPCR空白对照水和阴性对照都P出来了,换了机器也还是P出来了,为什么?
12345l6i
体系有污染,或者实验样本浓度太高,加样手法有问题,枪头在pcr管子上面开会晃,污染了其他孔位
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问
qPCR熔解曲线都是乱的,荧光信号强度也不高,9个孔4个过不了阈值没Ct,为什么?
Eason老歌迷
可能是反应体系污染,结合NTC和NRC结果确认污染情况,建议从水,引物,酶和环境等逐一排除污染。也可能是试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效,建议用新的试剂做对比实验。或者是仪器长时间未校准,建议定期进行仪器校准保养可能是。耗材与仪器不匹配,需确认对应仪器对耗材的要求。
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问
LPS诱导细胞炎症相关信号通路
bamboopiggy
lps诱导炎症,就必然和一些经典的通路有关系。至于抑制剂,有得公司有mapk抑制剂得library,或者你可以看看FHPI,或TAK-715,都是p38的抑制剂
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问
qpcr同一样本的三个复孔,A产品八联管做重复性很好,B产品重复性很差,但是师姐用B产品做重复性没有问题,那问题出在了哪
whilt-shirt
有可能是人为操作的差异,建议多次重复
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问
设计引物中16s是什么?该怎么找
Eason老歌迷
16SrRNA即16SribosomalRNA,是原核核糖体30S小亚基的组成部分。16S中的"S是一个沉降系数,亦即反映生物大分子在离心场中向下沉降速度的一个指标,值越高,说明分子越大。16SrRNA基因是细菌上编码rRNA相对应的DNA序列,存在于所有原核微生物的基因组中。16SrRNA具有高度的保守性和特异性以及该基因序列足够长(包含约50个功能域)。
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问
关于PCR,德塔CT值的问题,采用ARMS-PCR法但按照说明书需要判读德塔CT,这个德塔CT值的意义是什么呢
Eason老歌迷
我们都是用2的负ΔΔct值次幂来判断qpcr的结果,不用Δct值,Δct值是目的基因组减去内参组。
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问
关于PCR曲线起始不平滑
凌晨三点Dxy
1.自动基线问题2.反应体系上机前混匀3.八连管盖盖紧,防止体系蒸发导致基线抬升
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问
求助引物设计实验中要找细菌的特征性序列的步骤
Topmicro
你所说的细菌特征性序列是指特定种属还是特定菌株?特定种属的话可以直接找论文看大家用的比较多的。特定菌株的得需要全基因组测序你自己比对查找了。
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问
PCR的扩增曲线坑坑洼洼像房颤了
凌晨三点Dxy
1.仪器电压电流是否稳定2.卤素灯是否老化没校准3.八连管质量怎么样,之前用有没有出现问题?这种情况是每次都出现,还是偶尔出现?4.往信号不稳的方面思考下
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问
关于PCR分子检测的内标问题
凌晨三点Dxy
PCR检测是否需要使用内标,以及是否强制使用内标,取决于具体的实验设计和检测目的,以及相关法规和规定。在某些情况下,如临床诊断、疾病监测和防控等,PCR检测结果的准确性和可重复性是非常重要的,使用内标可以帮助校正不同样本之间的扩增效率差异,以及不同批次实验之间的误差。因此,在这种情况下,使用内标是推荐甚至必要的。然而,在其他一些情况下,如科研实验或一些特定类型样品的检测等,PCR检测的结果可能更多
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问
做PCR时只加一种引物,琼脂糖凝胶电泳可以跑出来条带吗
huang282815
加一种引物一般是没有条带的,一般是加一对引物
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问
请问pcr内参很高是怎么回事呢?之前跑鼠没问题,但人的就很高?
爱吃水稻的小呆瓜
可能的原因有以下几点:1.RNA质量不行。具体就是RNA浓度很低,或者部分降解;2.cDNA浓度不够。检查cDNA是否稀释,反转录时RNA的量是不是不够;3.引物设计的不好。引物结合的效率不高,需要更多的循环数才能达到阈值;4.选择内参基因不对。不是所有物种和材料都是相同内参,可能前期要多选几个内参,看那个内参比较稳定
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问
qpcr测蛋白Tm值
Eason老歌迷
测蛋白Tm值?学习了。加样有没问题,程序因该和普通qpcr一样是相对固定的吧,另外这个机器需要用ROX矫正么,应该一一排除。
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问
为什么我的内参跑不出来呢??
是付先生的小可耐
1.提的Rna有问题2.引物设计不对3.加样问题
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问
在做荧光定量pcr三个平行时候,怎么做才能使三个平行的差异降低?
whilt-shirt
换用高精度的移液器,选择挂壁低的枪头
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问
前后引物同时加入为什么会P出两条带
n0y0j7
碱基配对不是绝对正确,会有错配的,结合在不同地方,扩增出不同的条带
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问
关于CRPC中AR和细胞系选择
Eason老歌迷
22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其父亲的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系;22RV1细胞系表达前列腺特异抗原。PC-3源于一位62岁白人男性IV级前列腺腺癌患者的骨转移灶;有低水平的酸性磷酸酶活性和5-α-*还原酶活性。
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