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问
如何根据保守序列设计简并引物?
junyong151
设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域, 且两个保守区域相距50~400个氨基酸残基为宜, 使得PCR产物在150~1200bp之间,最重要的是每一个保守区域至少有6个氨基酸的保守区,因为每条引物至少18bp左右。若比对结果保守性不是很强很可能找不到6个氨基酸序列的保守区,这时可以根据物种的亲缘关系,选择亲缘关系近的物种进行二次比对,若保守性仍达不到要求,则需进行三次比对,总之,究竟要选多少序
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问
实时荧光定量PCR仪中的多通道指什么,有什么用? 每个通道怎么都有颜色标记?
土井挞克树
针对每一种荧光的检测器,比如你在一个管中做多个颜色,针对多个靶基因。每个颜色需要一个检测器来检测荧光信号的强弱,每一个针对不同颜色的检测器,就是一个通道
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问
Ncbi上SNP位点附近核苷酸序列没有了?
土井挞克树
这个版本可以后退一页进行查看的。
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问
PCR验证Circ RNA环状特性实验gDNA一直可以出条带
土井挞克树
考虑还是引物设计的不恰当,重新设计一下引物。
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问
酶切前,出现2 ,3条带的原因是什么?
Dr_劉医生
应该是降解了,导致引物的分子量不一致,
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问
RT-LAMP假阳性问题
灵枢天问
你再拿之前没加的做一次看看是不是你的试剂污染了
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问
QPCR溶解曲线异常,求解
bamboopiggy
你的引物不特异,所以鼓包了,换个引物。
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问
为什么冷冻切片切肌肉组织,切出来组织会碎?
汤姆卜丽波
有可能是取组织的时候,操作问题,也有可能是你操作时间太长
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问
小鼠睾丸HE切片,这是为啥出现这个样子
土井挞克树
固定时间是否太短,感觉固定时间不够。
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问
求助!RTPCR扩增曲线 溶解曲线问题
yanlai000
看着是什么非特异性扩增,熔解曲线的峰也都小于80℃,可能是引物可能不合适或者RNA降解,重新设计引物跑一下试试
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问
请问DNA实验中的内参基因可以用于RNA实验中吗
汤姆卜丽波
就是指gapdh这些么?可以的
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问
做RT-qPCR大家组内差异大吗?是如何解决的啊?
灵枢天问
一般来说,操作没问题的话三组重复ct不会超过0.5
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问
在做实时荧光定量PCR时扩增效率低是怎么回事儿?
土井挞克树
可能是模版提取过程中残留的抑制PCR反应的物质在起作用,建议你把模版稀释几倍试试。引物量要适当,一般在0.1~0.2微摩
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问
PBMC诱导ipsc单克隆
Z3JV
你好,请问你做出来了吗,我现在也在做PBMC重编程为IPS,可以请教一下你做成功的方法关键吗
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问
已知细菌中含有某个基因,可否将这个基因作为引物?
bamboopiggy
你可以把这个基因做为你qpcr的基因来用,但是引物设计要符合realtime pcr引物的要求。
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问
qPCR加完样之后可以先放在4℃冰箱吗
凌晨三点Dxy
4小时内放4℃冰箱,超过4小时放-20℃冰箱
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问
qpcr ctsd值大于0.5的数据能用么? 怎么解决该问题
土井挞克树
不建议用,大于0.5容易得出阴性结论。
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问
荧光定量pcr的扩增曲线是图片这样是什么原因呀?
lanlvmaomao
我觉得可以提高一下你的cdna的浓度
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问
qpcr 内参ct值在15-25左右,但是目的ct值在31左右。怎么解决ct值过高问题,数据是否能用?
bamboopiggy
内参在15-25,目的在31是可以的,但是数据能不能用要看melt curve
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问
使用NCBI进行3个物种的同种基因对比结果,怎么设计PCR引物
郭郭求祥瑞
我一般在ncbi找到基因的ID号,在primerbank上输入物种和id号,在里面挑选,一般出来的第一个第二个设计都没问题
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