实验问答21,905,351 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问qPCR加样方法小技巧

sswei

加样操作方法，以便更好的开展工作。使用流程：拧到需要的量程，装上枪头，然后手握住枪柄，大拇指按住上面的按钮至第一档位，枪头插入试剂液面下，轻轻松开拇指按钮，移出试剂，把枪头插入要加入试剂的管子，拇指按下枪头，为了把枪头里面的试剂残留都打出去，拇指要用力按至第二档位。用过的枪头如果不用了，可以用拇指按住枪顶端的另一个按钮，把枪头打掉，落到废液缸里。 1、加样前，一定要检查吸头是否上紧，以免液体

3 回答2103 围观

问转录组数据中的CDS序列可以用于设计引物吗

huarenqiang5

转录组数据中的CDS序列能够用于设计引物。

5 回答1656 围观

问目的基因260bp左右，导入19t载体用M13引物做菌落PCR鉴定，产物应该多大？谢谢

sswei

如果模板序列已知的话，直接将引物序列和模板进行匹配，两条引物之间的DNA片段长度即为目的PCR产物的大小；如果想知道PCR仪反应后的产物大小，可以跑琼脂糖凝聚电泳，照胶仪下根据Marker的指示条带读取产物的大小，或者可以用照胶仪自带的软件直接读出所有pcr产物条带的大小。

3 回答828 围观

问阳性样本FAM通道有值，VIC通道没出，是什么原因？

dxy_rnzkkoz9

把你的基线改一下呢，把1到15个循环拉直了再看。

4 回答1340 围观

问插入序列与egfp之间序列有很多碱基会引起突变吗

juyue2010

可能会，最好是将中间序列去掉，仅保留少量碱基，

3 回答486 围观

问实时荧光定量pcr同一个引物，不同时期的四个样品，三个合适，一个有杂峰，是什么原因

loveliufudan

可能的原因有以下几个：样品制备不同：不同制备方法可能导致样品中出现不同的杂质，影响实时荧光定量的准确性。因此，应尽可能使用相同的制备方法来制备样品，以减少可能的差异。样品质量差异：如果样品质量存在差异，例如某个样品受到了污染或者存在一些异常情况，就可能导致杂峰的出现。这种情况下，需要重新制备样品或者进行进一步的处理。仪器问题：实时荧光定量是一种非常敏感的技术，如果仪器存在问题或者使用不当，就可能出

4 回答643 围观

问为什么巢式PCR失败且第二轮很多smear？

loveliufudan

可能是由以下原因造成的：模板DNA质量差：模板DNA质量对PCR反应影响较大，如果模板DNA质量差，可能会影响PCR扩增效果。建议使用高质量的模板DNA，并通过紫外光谱仪等方法检测DNA质量。反应条件不合适：PCR反应条件是影响PCR扩增效果的重要因素，如果反应条件不合适，可能会导致PCR失败。建议优化反应条件，包括温度、时间、引物浓度、MgCl2浓度等因素。引物设计不合适：引物的设计是PCR反应

3 回答851 围观

问请问我这pcr条带是拖尾了么

loveliufudan

您的PCR条带应该是出现了拖尾现象。可能有以下原因：模板不纯或降解Buffer不合适退火温度偏低酶量过多dNTP、Mg2+浓度偏高循环次数过多您可以尝试以下对策：纯化模板或更换新鲜模板更换Buffer适当提高退火温度适量用酶适当降低dNTP和镁离子的浓度减少循环次数

4 回答579 围观

问PCR实验研究突变型p53的引物有什么

土井挞克树

去ncbi网站上搜索突变型p53，根据需要可以选择引物。

3 回答358 围观

问提rna测浓度后，260/230显示有杂质污染，这种情况下做荧光定量会有影响吗?

土井挞克树

少量杂质问题不大，荧光定量不会显影

4 回答423 围观

问组织样品如何提取mRNA

huarenqiang5

（一）动植物总RNA提取-Trizol法　　 1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。　　 2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。　　 3、取上层水相于一新的离心管，按每ml

3 回答589 围观

问骨髓细胞做凋亡的qp一般需要做哪几个基因？

天一湖医者

主要包括Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1等

4 回答255 围观

问PCR 目的基因扩增

huarenqiang5

考虑以下几点原因：引物没有设计好、模板浓度过低、温度过高等。

3 回答1201 围观

问Qpcr求助，求问老师，有遇到过这种大部分ct值 undete的情况吗？

dxyc42u

你这溶解曲线有非特异性扩增，好好排查下

3 回答661 围观

问为什么病毒感染细胞后收集上清进行密度梯度离心后检测病毒基因组拷贝数会有两个峰值？

汤姆卜丽波

可能是存在病毒基因重复，或者是细胞本身感染

3 回答351 围观

问如图，pcr结果曲线一直不超过0，且呈现负值的原因？

huarenqiang5

你的这个情况主要考虑是设置的问题导致，建议重新设置一下。

3 回答194 围观

问同源重组连接问题

loveliufudan

从你提供的信息来看，可能有以下几个原因导致你的载体体和目标片段同源重组连接不成功：同源重组效率低。同源重组是一种复杂的过程，很容易受到多种因素的影响，如DNA序列相似性、长度、GC含量、连接比例、转化复苏等。如果同源重组效率很低，那么单菌落的数量就会很少，甚至没有。建议检查DNA序列和GC含量，同时考虑优化连接比例、增加转化量等措施来提高同源重组效率。质粒不稳定。质粒构建成功后，可能存在不同程度的

3 回答1354 围观

问PCR扩增曲线为负数，并且到0就不上升了，什么原因呀，求大神们指导，急。。。。

土井挞克树

说明仪器设置的不对，或者你的样本根本没有进行扩增

3 回答256 围观

问求助，PCR问题

sswei

有很多原因。如果目的条带比较单一且没有杂带，说明循环数偏低，可以适当增加循环数；如果杂带多，目的条带看不清或者很弱，说明整个扩增体系或反应程序有问题，需要优化PCR体系和程序。

6 回答420 围观

问单核，单个核细胞分离培养，出现可以移动的白点黑点是什么？

土井挞克树

考虑是污染，建议先加入抗生素看一下趋势。

4 回答325 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序