实验问答21,876,242 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问关于多转录本引物设计的进一步问题

dxyc42u

细胞样本提取的rna是成熟rna，经过逆转录后的cdna不包含内含子序列，设计引物时要考虑内含子外显子的问题，不然怕扩增不出来

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问求多个基因变体如何设计引物

小芙fu

最好设计三对引物，一对为同源序列，另两对分别针对特异序列，这样分析出来的结果更丰富。如果有一个Transcript variant不能设计特异的序列，就设计另一个Transcript variant的特异性序列和两个Transcript variant的同源序列即可。我认为，分别测定两具Transcript variant的表达水平比较好，因为两个Transcript variant的干扰效果可能

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问or值一般多少以上才有写文章的必要

loveliufudan

对于确定OR值是否具有写文章的必要性，没有一个固定的标准。研究结果是否具有重要性和科学意义是评估是否值得写文章的关键因素。此外，还需要考虑以下因素： 1. 统计显著性：除了OR值的大小，还需要评估其统计显著性。使用统计检验方法（如卡方检验或Fisher精确检验）来计算OR值的置信区间和p值。如果OR值的置信区间不包含1且p值小于预设的显著性水平（通常为0.05），则表示结果具有统计学意义。 2.

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问关于血浆、血清中提取RNA的一些细节问题

huarenqiang5

和采血生化一样最重要的是严格无菌操作，再者需要用含有抗凝剂的采血管采血。

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问求助在制备一定浓度的菌悬液对动物进行攻菌时，如何避免因为清洗菌体导致的菌量丢失？

huarenqiang5

最关键的是清洗时要动作缓慢和轻柔，避免快速、大幅度清洗。

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问请问有人知道GE（基因组当量）吗？它和QPCR的ct值关系有人知道嘛

loveliufudan

GE（基因组当量）是指在一定条件下，特定基因组的DNA分子数。它通常用来描述基因或基因组的相对数量。GE的测量方法可以通过定量PCR（qPCR）中的Ct（阈值周期）值来估计。在qPCR实验中，Ct值表示荧光信号强度达到设定阈值的循环数。Ct值越小，说明初始模板的浓度越高，而GE则与初始模板的分子数有关。一般情况下，Ct值和GE之间存在负相关关系，即Ct值越小，GE越高，反之亦然。通过构建标准曲线，

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问qpcr设计引物时，有多个转录本怎么选择啊？是要都设计嘛？

huarenqiang5

转录本的选择重要在于，不同转录本可能会有组织表达差异，比如A转录本在心肌细胞优势表达，但在血细胞中是B转录本的优势表达，那么如果我们做的是血细胞的qpcr，选择A转录本就会得到表达量低这个不是很正确的结论。此外不同转录本可能存在较大的功能差异。在不清楚优势转录本是哪一个的情况下，建议选择两对引物都订，一起跑，选择跑出来表达量较高的那一对，认为覆盖到了优势转录本。

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问我是同时摇菌摇了大约14—15个小时，marker是2000bp，为什么四个样（四个样是不同质粒的菌液）在我目的片段有深有浅？

于小鱼鱼1998

深浅不同可能是你的样品初始含量不同，建议统一一下

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问求助🆘想用荧光定量PCR方法检测组织中的细菌载量，应该如何进行？怎么设计引物呢？

晓雨知春来

1.株及培养选择实验室冻存的乳酸杆菌和双歧杆菌菌株，乳酸杆菌菌Lactobacillussuis(SL0501)接种于改良LBS培养基上，28℃120r/min摇床振荡培养24h采用细菌提取试剂盒对其DNA进行提取，使用核酸蛋白分析仪检测 OD 值。2.双歧杆菌株Bifidobacteriumsuis(SB09NJ01)接种于改良 MRS培养板上28℃120r/min摇床振荡培养24h后收集培养物

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问巢氏pcr，两次程序都一样，这种杂带比较多怎么修改程序

汤姆卜丽波

你可以适当延长退火时间，降低退火温度

4 回答765 围观

问求问熔解曲线怎么看啊。只知道这个引物特异性不好，但是具体的原因我不会分析，求各位帮忙看一下。这种双峰是因为扩出了多条带吗？

土井挞克树

双峰多数原因是因为样品有降解，形成的双条带。

3 回答453 围观

问请问提交投稿前润色方面需要润色图表吗

dxyc42u

一般投稿前是不需要润色图表的，

5 回答319 围观

问请问润色语言级别的问题

feixue7758527w

这个情况你可以要求润色公司进行再次润色的，达到你效果再说吧。

3 回答329 围观

问哪里可以做荧光探针PCR HP菌株分型

土井挞克树

有专门的pcr公司可以做，费用应该在几千元左右

3 回答346 围观

问同一cDNA模板，同一引物，熔解曲线有单峰有双峰？

loveliufudan

这可能是由于以下原因： 1. 引物二聚体（primer dimer）：当引物的浓度过高或者PCR条件不合适时，引物可能会相互之间形成二聚体。这些二聚体在熔解曲线分析中可能会显示为一个额外的峰值。 2. 非特异扩增：如果PCR条件不理想或者模板DNA污染，可能会导致非特异扩增，这也可能在熔解曲线分析中表现为一个额外的峰值。 3. 引物或模板的退火温度差异：如果引物或模板有不同的退火温度，可能在熔解曲

4 回答1330 围观

问graphpad做森林图置信区间过大，用箭头表示怎么操作

小陈医生crb

请问题主现在学会如何添加箭头了吗

6 回答2516 围观

问同源重组克隆时序列GC含量过高，一直连不进去，有什么办法可以改善这个问题吗？

dxyc42u

使用GC buffer我们实验室有人搞出来的

3 回答3908 围观

问多重实时荧光PCR方法学建立，需要什么性能验证

阿繁体哥哥

灵敏度，准确度，线性范围，最低检测线

4 回答532 围观

问求助RTPCR

阿繁体哥哥

电压，灰尘，温度不准，试剂的问题都有可能

3 回答369 围观

问pcr怎么区分是引物二聚体还是产物

dxy_wr311h33

引物二聚体对照marker一看，分子量很小且边缘不清晰。

4 回答1058 围观

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