• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        不同条件pcr,条带相同

        相关实验:双重 PCR 实验

        user-title

        dxy_kazga6uq

        前后做了两次pcr,用的cDNA模板

        基因大小在3/4kb,但是每次扩出来都只有1/2kb,这是什么原因呢?更改条件扩出来的条带也没有变化,不知道该怎么修改条件了

        因为引物Tm值只有四十多,所以退火温度选择也低

        ①94℃1min,后98℃10s+45℃15s+72℃1min,再72℃10min

        ②94℃1min,后98℃10s+42℃30s+72℃2min,再72℃10min

        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        沫子大大

        有帮助

        基因扩增大小小于期望大小的原因可能有很多种,包括引物设计问题、扩增条件不恰当、DNA模板质量问题等。针对你提供的PCR条件,建议尝试以下优化:尝试增加退火温度,比如从45℃调整到50℃或更高的温度,看看是否能够增加扩增产物大小。
        延长延伸时间,比如从1分钟延长到2分钟。确保使用高质量的DNA模板,并检查模板DNA的浓度是否适当。如果以上优化步骤无法解决问题,建议尝试更换引物,并重新进行优化。

        user-title

        sswei

        有帮助

        可能要考虑以下这几种情况:

        1、低质量的cDNA:cDNA合成过程中可能存在RNA降解、反转录不完全或反转录过程中引入的污染物等问题,导致cDNA质量不佳,从而影响PCR扩增效果。

        2、PCR反应条件不当:PCR反应条件包括温度、反应时间、引物浓度、酶浓度、缓冲液等,如果这些条件设置不当,可能会影响PCR扩增效果。

        3、引物设计问题:引物的设计可能存在问题,比如引物长度不合适、引物序列中存在不稳定结构、引物与模板匹配度不佳等,都可能导致PCR扩增失败。


        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序