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        引物设计的过长会有什么弊端?

        相关实验:质粒构建技术

        user-title

        土井挞克树

        我做质粒构建最后引物长度有点长,请问大家有什么弊端?

        wx-share
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        5 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        引物过长会增加成本和引物的Tm 值,会影响PCR的特异性,引物越长,能够配对的概率减少,所以特异性增加或引物越长,包含的碱基越多,发生错配的概率就越高。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        引物太长,会导致Tm值过大,不好pcr,另外一个是可能导致引物与模板结合能力下降

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        引物长度过长可能会导致以下问题:

        特异性降低:引物过长会增加引物与非目标序列的匹配,从而导致PCR产物的非特异性扩增。这可能会导致PCR产物的杂交、非特异性条带或假阳性等问题。

        扩增效率降低:引物过长会导致引物与目标序列结合的热力学稳定性增加,这会降低PCR扩增的效率。引物长度推荐在18-24个碱基对之间,最大不超过30个碱基对。

        质粒长度限制:引物长度过长可能会限制质粒长度的大小,这可能会影响质粒的复制和转化效率。

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        引物设计过长会导致延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。此外,引物过长还会导致其特异性降低,因为引物越长,能够配对的概率减少,特异性增加。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        引物过长导致退火温度增加,延伸温度增加,如果最适延伸温度超过DNA聚合酶的最佳延伸温度,则不能保证产物的特异性

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