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        质粒构建技术

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        质粒作为低等生物体内的最小遗传单位,具有分子量小、复制速度快等诸多优点,质粒构建为生物工程提供工具载体。

        原理

        对目的基因和载体 DNA 进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

        应用

        克隆

        来源:丁香实验

        操作方法

        T4 DNA Ligase

        T4 DNA Ligase 即 T4 DNA 连接酶,可以催化粘端或平端双链 DNA 或 RNA 的 5’-P 末端和 3’-OH 末端之间以磷酸二酯键结合,该催化反应需 ATP 作为辅助因子。

        🔥 重组酶构建质粒

        基于同源基因重组原理,适用于向几乎任何载体在任何位点进行定向克隆,无需考虑插入片段自身携带的酶切位点可高效克隆 50bp~10kb 片段,同时构建时间也大大缩短。

        🔥 同源重组法构建质粒

        质粒的构建是分子生物学研究中常用的实验技术,质粒是能够自主复制的环状 DNA 分子,将特定的基因序列插入到工程质粒中,再把质粒转化到细菌、细胞或酵母中,使质粒在其中表达。

        🔥 双酶切实验

        在探索基因功能的实验中,我们需要过表达目的基因以判断其发挥的功能,因此我们需要将目的基因构建到表达载体上,再将载体通过侵染或瞬时表达的方式转入植物。双酶切实验可以将载体由环状变为线状,线状载体和带有同源臂的目的基因进行同源重组即可完成载体构建。

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