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RAW264.7本身是不表达炎性体成分ASC的,可能不适合于检测下游的GASDMIND
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一般用GSDMD成功率与细胞类型关系很大,在无法更换细胞类型的情况下可以适当增加细胞浓度。
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以下是一些可能导致GSDMD激活失败的因素和建议的解决方案:
细胞状态问题:GSDMD的激活需要细胞处于合适的状态,如细胞密度和培养时间等。建议使用不超过90%的细胞密度,避免过长时间的培养,通常24小时后的细胞可能更容易激活GSDMD。
实验条件问题:实验条件如药物浓度、处理时间、光线条件等都可能影响GSDMD的激活。建议优化实验条件,调整处理时间和浓度等。
操作问题:操作不当也可能导致GSDMD激活失败。建议尽可能避免细胞接触空气,避免冷震或震荡,并注意细胞裂解缓冲液的成分和pH值。
细胞类型问题:GSDMD在不同类型的细胞中表达和响应的方式可能不同。建议检查RAW264.7细胞是否表达GSDMD,并考虑尝试其他细胞系。
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