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        目的蛋白洗脱不下来或洗脱率低是什么原因导致的?

        相关实验:用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

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        feixue7758527w


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        5 个回答

        user-title

        rh682

        有帮助

        洗脱剂种类,体积选用不足,pH条件等不适当。

        user-title

        晴空a

        有帮助

        可能原因:1.洗脱条件太温和;2.蛋白在柱子中沉淀;3.非特异性的疏水或者其他作用;4.蛋白和柱子接触时间过长。

        user-title

        sswei

        有帮助

        His标签蛋白挂柱后洗脱不掉可能的原因及建议:

        洗脱条件太温和:可以通过降低pH和增加咪唑浓度找出最佳的洗脱条件。但PH低于3.5可能会导致Ni2+脱落,这时候就需要采用咪唑竞争性洗脱法。

        蛋白沉淀在柱子上:尝试减少上样量和孵育时间,避免蛋白沉淀。

        非特异性吸附:添加非离子去污剂洗脱缓冲液或增加NaCl的浓度。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        (1)洗脱缓冲液的体积太少

        增加洗脱缓冲液的体积

        (2)洗脱的时间不够

        增加洗脱缓冲液与磁珠反应的时间

        (3)洗脱缓冲液中谷胱甘肽浓度太低

        增加洗脱缓冲液中谷胱甘肽的浓度

        (4)洗脱缓冲液的pH过低

        增加洗脱缓冲液的pH值。将 pH 增加到 8-9,会增强洗脱而不用提高洗脱所用 GSH 的浓度。

        (5)洗脱缓冲液的离子强度过低

        增加洗脱缓冲液中的离子强度,在洗脱缓冲液中加入0.1~0.2M的氯化钠

        (6)洗脱缓冲液中的谷胱甘肽被氧化

        使用新鲜配制的洗脱缓冲液

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能由以下一些原因导致:

        离子交换柱等柱子选择不当:离子交换柱可以选择不同的离子交换介质和不同的离子强度,如果选择不当,可能会影响蛋白的洗脱。例如,如果离子交换柱选择的是强离子交换介质,而目标蛋白质带有相对较弱的负电荷,则可能会导致目的蛋白无法与柱子结合或难以从柱子中洗脱出来。

        pH条件不当:pH值对蛋白质的结构和功能有很大影响,如果选择的洗脱缓冲液的pH值不适合目标蛋白,可能会影响蛋白的洗脱。例如,如果目标蛋白在酸性条件下不稳定,则不宜选择酸性洗脱缓冲液,否则可能会导致蛋白的失活或降解。

        蛋白质结构不稳定:有些蛋白质的结构比较不稳定,容易聚集或产生凝集体,这种情况下可能会影响蛋白的洗脱。例如,一些多肽激素在高浓度时容易形成凝集体,导致难以从柱子中洗脱出来。

        洗脱缓冲液的浓度或成分不当:洗脱缓冲液的浓度或成分对蛋白的洗脱也有很大影响。如果洗脱缓冲液的浓度过低或成分不当,则可能会导致目标蛋白难以从柱子中洗脱出来。

        洗脱条件不当:洗脱条件包括洗脱缓冲液的浓度、pH值、离子强度等,如果选择的洗脱条件不当,则可能会导致目标蛋白无法从柱子中洗脱出来。例如,在离子交换柱中,如果洗脱缓冲液中的离子强度过低,则可能会导致蛋白无法与柱子分离。

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