琼脂糖凝胶电泳拖尾的原因，用的是KOD酶预混mix做PCR，以前能跑出清晰条带，现将试剂都尝试换了遍，都没改善

不知道marker是不是也有拖尾现象，如果marker正常，有可能是你的模板浓度太高。如果marker不正常，排查一下琼脂糖凝胶和缓冲液的问题，buffer不正确也可能产生拖尾

是不是配的胶没混匀，marker跑的怎么样

考没考虑过你模板的问题？或者是你胶没融好？

电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑：

1、PCR产物自身原因：

往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.

对策：①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度.

2、电泳体系的问题：

（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.（2）上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.（3）电压太高.（4）适当把你的胶的浓度加大.（根据你的片断大小而定）

上样量大了？

pcr模板量降低些？

退火温度调高试一下，看是不是非特异结合