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科研学霸天团，48小时有问必答

问如果提高单细胞测序样本送样时的稳定性和可用性以及避免污染等。

loveliufudan

单细胞测序样本是非常宝贵和敏感的，因此为了确保样品的稳定性和可用性，以及避免污染，需要采取以下预防措施：样本采集：在采集单细胞前，应使用无菌技术准备所需的工具和材料，避免外来微生物的污染。此外，对于某些样本类型（如血液或骨髓），需要避免凝血或者其他处理可能影响单细胞的因素。样本处理：在将样本分离出单个细胞之前，应避免使用会损伤细胞的工具和技术。一些样本处理方法可能会影响细胞的完整性和质量，因此需要

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问大肠杆菌同源重组基因敲除筛选失败

loveliufudan

在这种情况下，你可以考虑以下几个建议：更换抗性基因：如果你的双抗筛选方法失败，可以尝试更换抗性基因，例如使用chloramphenicol、tetracycline等抗生素进行筛选。这些抗生素与kanamycin和gentamicin不同，可能对你的敲除菌株具有更高的选择性。采用CRISPR/Cas9等技术：CRISPR/Cas9是一种现代分子生物学技术，可以精确剪切目标基因，并插入自定义DNA序

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问插入碱基

土井挞克树

考虑是兼并性差的原因，可以更换插入方法，或者基因无法共存，可以把两个碱基延长一些再插入

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问想请教各位大佬敲除基因后功能受损，疾病中该基因mRNA和蛋白上调，说明是修复作用？

loveliufudan

当疾病状态下该基因mRNA和蛋白质上调时，可能有多种解释。其中一种可能是，这个基因蛋白质在疾病状态下发挥了某种作用，例如代偿机制、损伤修复等。另一种可能是，这个基因在疾病状态下被过度表达，从而导致异常的生理或病理状态。因此，需要结合具体的实验数据和文献资料，进一步探究该基因在疾病状态下的作用机制和生物学功能。

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问单细胞转录测序问题求助？

loveliufudan

单细胞转录组测序需要高质量的细胞核悬液才能得到可靠的结果。以下是一些具体要求和质控步骤：细胞核悬液的纯度要高：细胞核悬液中含有其他细胞成分或杂质会影响转录组测序的准确性。因此，在准备细胞核悬液时，应当尽量避免携带细胞质等其他成分。细胞核悬液的完整性要好：细胞核悬液的完整性对于单细胞转录组测序来说非常重要。破损的细胞核会导致RNA的降解，从而影响测序结果的准确性。因此，在准备细胞核悬液时，应当尽量避

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问求助，请问这是染菌了吗？

loveliufudan

很明显的细菌污染，建议加强培养物和实验设备的无菌控制、更换新的细胞培养物。

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问新手求助单细胞RNA测序？

loveliufudan

在进行单细胞RNA测序前，通常需要同时提取包括细胞核RNA和细胞液RNA在内的所有RNA种类。因为RNA分布在不同的细胞组分中，细胞核RNA和细胞液RNA具有不同的生物学功能，因此同时提取这两种RNA，可以全面了解单个细胞的转录本信息。至于细胞核RNA的提取方法，可以使用一些商业化的试剂盒。这些试剂盒可以通过使用异丙醇/氯仿分离细胞核和细胞液，将细胞核RNA和细胞液RNA分离。除此之外，也可以使用

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问EMSA实验中单独分析标记DNA可见条带（DNA已标记biotin），但1.5u g纯化蛋白和探针标记的DAN混合后上样无带

loveliufudan

这可能是由于以下原因之一导致的：可能存在过多的非特异性结合蛋白或污染物，导致特异性带的信号被掩盖或者丧失。这种情况下，我们建议优化实验条件，如调整反应温度、缓冲液组成、盐浓度、探针和蛋白的比例等，以最大限度地减少非特异性结合。没有充分优化 EMSA 实验条件，导致探针和蛋白的结合比例过低，无法形成特异性带。在这种情况下，建议尝试优化 EMSA 实验条件，以最大限度地增强探针和蛋白之间的结合，例如调

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问荧光免疫层析

土井挞克树

没有偶联成功，偶联成功的话在测试的时候就会有条带，不需要等太久。

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问求助求助

汤姆卜丽波

我感觉可能是你电泳缓冲液的问题，因为都拖尾了，换一个新的缓冲液

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问CTAB提取真菌DNA实验中，CTAB加入到真菌以后为什么要65度水浴？

loveliufudan

这是因为，CTAB能够结合到DNA的负电荷上，从而使DNA脱离细胞质和蛋白质等杂质，形成一种CTAB-DNA复合物。热处理可以加速CTAB-DNA复合物的形成，从而加强DNA的提取效果。此外，65℃水浴也有助于裂解真菌细胞壁和细胞膜，使DNA更容易被CTAB和其他化学试剂提取出来。

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问做定点突变，第一步中，目标质粒扩增，扩增的是质粒中的目的片段还是质粒载体+目的片段

loveliufudan

在做定点突变的第一步中，我们需要对目标质粒进行扩增。扩增的是整个质粒，包括质粒载体和目的片段。通过PCR扩增，我们可以获得大量的质粒DNA。在后续步骤中，我们会引入定点突变，然后将突变的质粒进行转化、筛选和鉴定。

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问外周血样本进行单细胞测序，如何保持样本活性最大，取样过程应注意什么？

loveliufudan

进行单细胞测序需要采集外周血细胞样本，并且在样本采集和处理过程中，保持细胞活性和完整性是非常重要的。以下是一些关于如何保持样本活性最大和取样过程应注意的建议：1.采集新鲜样本：尽可能采集新鲜的血液样本，避免长时间存放或运输，这会降低细胞的活性和完整性。2.使用无菌技术：在取样和处理样本的过程中，应该使用无菌技术，避免任何细菌或病毒污染样本。3.使用合适的抗凝剂：血液样本在采集后需要立即加入合适的抗

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问请问工程菌进行菌落pcr无条带是为什么？

汤姆卜丽波

全都没有那很可能是你的引物用的有问题，因为最起码2该有

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问长片段基因的扩增如何选择引物

z流沙z

引物设计没办法避开中间序列的错配或者突变，只能设计尽量好结合、相对特异的引物序列，使用高保真pcr酶可以降低突变概率

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问引物设计的过长会有什么弊端？

sswei

引物过长会增加成本和引物的Tm 值,会影响PCR的特异性，引物越长,能够配对的概率减少,所以特异性增加或引物越长,包含的碱基越多,发生错配的概率就越高。

5 回答11105 围观

问链霉亲和素的表达纯化

土井挞克树

脱盐部分浓度太高会导致蛋白聚化，建议降低浓度

2 回答528 围观

问噬菌体裂解酶没有空斑，但却有杀菌活性

土井挞克树

可能是细菌密度太低了，所以肉眼看不到空斑

2 回答544 围观

问试剂盒提取细菌基因组，细菌离心离不下去

z流沙z

摇菌的时间和体积多一点，这样提出来就高了

4 回答555 围观

问重复测量方差分析不同时间点样本数不同怎么办？

土井挞克树

那就只能做普通方差分析了，不可以做重复测量的方差分析

3 回答765 围观

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