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        EMSA实验中单独分析标记DNA可见条带(DNA已标记biotin),但1.5u g纯化蛋白和探针标记的DAN混合后上样无带

        相关实验:凝胶迁移实验(EMSA)

        user-title

        BudPlum

        纯化蛋白bca测浓度后上样1.5ug,biotin标记dna后单跑可见条带。预跑130v1h,跑完上样,70v跑15min,转90v跑到底。转膜380ma30min。uv交联20min。blocking15min,亲和素15min,wash buffer5min。

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        1 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这可能是由于以下原因之一导致的:

        可能存在过多的非特异性结合蛋白或污染物,导致特异性带的信号被掩盖或者丧失。这种情况下,我们建议优化实验条件,如调整反应温度、缓冲液组成、盐浓度、探针和蛋白的比例等,以最大限度地减少非特异性结合。

        没有充分优化 EMSA 实验条件,导致探针和蛋白的结合比例过低,无法形成特异性带。在这种情况下,建议尝试优化 EMSA 实验条件,以最大限度地增强探针和蛋白之间的结合,例如调整反应温度、缓冲液组成、盐浓度、探针和蛋白的比例等。

        可能是在转膜过程中出现了问题,导致标记的 DNA 没有成功转移到膜上,从而无法与蛋白结合。在这种情况下,建议仔细检查转膜的条件是否正确,并考虑优化转膜条件。

        可能存在 DNA 质量或浓度的问题,导致标记的 DNA 无法与蛋白结合。在这种情况下,可以使用其他方法检测 DNA 的质量和浓度,如琼脂糖凝胶电泳和比色法等。

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