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feiniao2005038：测序本人拿菌液让生工测序，结果是双峰，是什么意思？怎么回事？重组的质粒用酶切鉴定没有问题， 丁香园网友zhaochengling认为： 1.有可能是基因重复，重复的两个拷贝之间有一个硷基的差异 样品本身被污染，这常常发生在样品为质粒和菌液的情况中。当使用通用引物测序时，如果刚好和样品中的几个质粒均能结合，那么就会出现这种情况，而且在同一位置上还可能有不止两个峰形； 2 ...

jc_484190：咨询3β-HSD的染色配方 请问有谁做过3β-HSD的染色啊？这种染色的配方是什么啊？南京的同学有没有在做得啊？ 丁香园网友jfeiharry认为： 刚刚baidu了一下，看了一点相关资料，希望对你有些帮助 3β-HSDH反应溶液 脱氢表雄酮（DHEA）10mmol溶于丙酮0.5ml 尼克酰胺（1.6mg/ml）1.0ml 硝基蓝四唑（NBT）（1 ...

问：请问提取细胞RNA的方法？答：细胞总RNA的提取：1、6孔板细胞汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂 1 ml，摇匀，无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中，加新开的氯仿0.2 ml，轻摇15 s。3、室温静置2-3 min后，12000 rpm，15 min，4 ℃，离心。然后 ...

flybaker：请教有关胰腺石蜡切片制作方法的问题 按照普通石蜡切片的制作流程做出的大鼠胰腺组织切片，能被染上的细胞很少，而且细胞间的空隙很大。我自己分析可能是由于胰腺厚薄不均，导致透明时间没掌握好，透明过度组织变脆。再加上胰腺形状不规则，切片时没切到整个面。不知道有没有人做过胰腺的石蜡切片，和普通组织的石蜡切片制作方法相比有没有什么需要特别注意的？？ 丁香园网友zgxsea认为： 是正常的大鼠 ...

phoolishkate：脂质体转染后必须用不含抗生素的培养基吗？ 我的培养基都加了青链霉素，转染后是不是不能用？ 丁香园网友applezph认为： 由于脂质体转染对细胞存在一定毒性，一般说来转染前的一次传代就应用不含抗生素的培养基，转染后的话我觉得也不应该加青链（我都是这么做的） 当然如果对自己的操作实在没有把握的话，我认为你可以考虑试试转染后加，但不要太早，4-6小时换液用无抗生素的，可以24 ...

p猫：稳定转染之后的细胞为什么荧光强度会有很大的不同？ 在建立稳定株的整个过程中都存在这个问题，理论上说同一个细胞克隆出来的细胞团里面的每个细胞表达蛋白的水平应该是一样的吧，可是为什么荧光显微镜下看荧光强度差异却很大呢？这样的稳定株能用来做后续的实验吗？ 丁香园网友lhczj认为： 如果不考虑荧光强度，细胞能够长时间保持有荧光，可以继续实验 我周围很多做稳定转染的也有这种情况 丁香园网友dtlxj ...

zy_dalian：请问Lipofectamine2000使用高手：转染后多久加药物? 加LIPO2000后，我选择4小时后换培养基. 那大家是换液后多久加药进行研究的呢?（根据自己研究的不同，药物是不同的）； 先谢谢啦！ 丁香园网友silentjill认为： 说明书上不是说的48-72小时后就可以了么？ 丁香园网友出来混的认为： 我是根据转的效率加药的 丁香园网友applezph认为： 一般Li ...

多年来我国病原微生物实验室包括临床实验室的生物安全防护问题一直未能得到足够的重视。2003年上半年爆发流行的SARS和最近有可能从实验室传播出去的SARS病例引起了社会的普遍关注。为了加强对病原微生物实验室的管理，防止从实验室传播传染性疾病，国务院正在草拟《病原微生物实验室安全管理条例》，将实验室的安全管理提升到依法管理的层面上。因此，临床实验室如何加强生物安全防护就成为我们急待解决的问题。 世界 ...

guoguoloo：彗星试验电泳前的细胞应该用什么方法保存 最近要做大鼠脑组织细胞和血淋巴细胞的彗星试验。因为取完组织细胞后不能立刻跑电泳，请问脑组织该如何保存，4度，-20度，-80度或液氮？ 丁香园网友hjhj4604认为： 比较麻烦，冷冻或低温都会对细胞造成DNA损伤，影响结果。 建议现取现做，实在不行暂放４度，时间不可过长。 丁香园网友djhmily认为： 请问，我把细胞收集了（PBS离心 ...

xiangyu_16888：关于稳定转染的若干问题 1 转染后24小时以1：10的稀释比例加入新鲜的含G418的培养基中，其目的是什么? 2 此时换液是否将DNA-脂肢体复合物去处? 3 加入G418的量是按体积加还是按细胞数加? 4 转染后培养基除了G418是否也加入双抗? 谢谢各位大虾了！ 丁香园网友bigbang_0_0认为： 1.利于两周后挑取单克隆. 2.是. 3.按体积加. 4.是. ...

shilei5794749：透明菌落OR 乳白色菌落？ 重组质粒做完转化后，板上长出来的菌落有透明的，有乳白色的．听说重组质粒长出来的菌应该是乳白色的，而透明的菌落很有可能是杂菌？？请问各位战友，这种说法有根据吗？？ 丁香园网友applepie118认为： 这种说法，至少在我作转化来看没有什么根据。 为什么会是乳白色得，难道是插入得片断引起了表型得变化，但是并不是每个插入片断都正好插入到质粒中影响 ...

Emmanuelle：用于转染的培养基有何要求? 为什么用于转染的培养基不能含有血清? 丁香园网友rissa999认为： 这个能不能含血清是要看你用什么转染载体的，其实有些阳离子脂质体和高分子聚合物类的转染载体可在有血清的培养基中进行转染。 一般情况下，用无血清的培养基主要是因为转染载体带正电荷，而血清中含有大量负电性的成分会竞争结合正电性的载体，导致载体与DNA复合物的稳定性降低，从而使转染效率 ...

问：Tris饱和酚和重蒸酚的区别和配制方法 答：Tris饱和苯酚（Tris saturated phenol）也称Tris平衡酚(Tris balanced phenol)，是添加了抗氧化剂8-羟基喹啉，tris pH8.0充分平衡的苯酚，呈黄色。常用于DNA抽提和纯化等。 重蒸酚是苯酚在182度蒸馏的组分。 tris配制方法：1、取出重蒸酚，室温放置68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以 ...

一、如何选购无尘洁净室专用真空包装机（选型购机注意事项） 根据真空包装机的主要结构和配置元件，一台优质的真空包装机必须具备以下基本条件： 1、选用优质的真空泵配套，该真空泵必须能保证有良好的品牌，业内老字号企业所生产的产品，如德国“LEYBOLD”、“BUSCH”、“BACKER”牌都是值 ...

1、任何进入无尘洁净室的人，必须先进入无尘更衣室，穿上无尘帽、无尘口罩、无尘衣、静电防尘手套、无尘裤、无尘靴（如图①所示）。经过这套外形很“酷”的防尘装备可将人们身上已有的灰尘隔离在无尘洁净室之外，但这才是第一步。 2、接着就要进入风淋室。所谓风淋室是指一条“吹风的长廊”，不过在这条长廊中吹出来的强风是没有任何静电存在的离子风。这种离子风所具有的中和 ...

由于用X光晶体衍射和NMR核磁共振技术测定蛋白质的三维结构，以及用生化方法研究蛋白质的功能效率不高，无法适应蛋白质序列数量飞速增长的需要，因此近几十年来许多科学家致力于研究用理论计算的方法预测蛋白质的三维结构和功能，经过多年努力取得了一定的成果。 蛋白质三维结构的预测方法通常包括：同源性建模和从头开始的预测方法。对数据库中已知结构的序列的比对是预测未知序列三级结构的主要方法，也即同源建模的方法。 ...

蛋白质二级结构的预测通常被认为是蛋白结构预测的第一步，二级结构是指α螺旋和β折叠等规则的蛋白质局部结构元件。不同的氨基酸残基对于形成不同的二级结构元件具有不同的倾向性。按蛋白质中二级结构的成分可以把球形蛋白分为全α蛋白、全β蛋白、α＋β蛋白和α/β蛋白等四个折叠类型。预测蛋白质二级结构的算法大多以已知三维结构和 ...

ExPASy工具包包涵的程序 ComputepI/MW：是ExPASy工具包中的程序，计算输入序列等电点和分子量的工具。对pI的确定基于早期研究中将蛋白质从由中性到酸性变性条件下迁移过程中所获得的pK值（Bjellqvist等，1993）。分子量的计算是把序列中每个氨基酸的同位素平均分子量加在一起，再加上一个水分子的分子量。 用户可以把序列整理为FASTA格式，或提供SWISS-PROT标识，或者 ...

根据组成蛋白质的20种氨基酸的物理和化学性质可以辨析电泳等实验中的未知蛋白质，也可以分析已知蛋白质的物化性质。 ExPASy工具包包涵的程序：http://www.expasy.ch/tools/ AACompIdent：与把氨基酸序列在SWISS-PROT库中搜索不同，AACompIdent工具利用未知蛋白的氨基酸组成去确认具有相同组成的已知蛋白。该程序分析时需提交的相关信息包括：蛋白质的氨基酸 ...

对各种方法所得到的蛋白质结构预测结果需要进行验证，以确定预测方法是否可行，确定其适应面。验证的一种方法是取已知结构的蛋白质，对这些蛋白质进行模拟结构预测，并将预测结构与真实结构进行比较，分析两者之间的差距。为了客观地评价各种预测方法，需要建立权威的评判机构，建立公共认可的蛋白质结构测试数据集。设立在马里兰生物技术研究中心的CASP就是这样一个系统（http://predictioncenter.l ...