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        稳定转染发现的问题

        互联网

        1795

        犯罪现场调查:最近作稳定转染的筛选。发现一个问题。绿色荧光细胞总是在没转染成功的细胞附近生长。而且,混合生长。怎么才能分离?难道加大418的浓度?

        丁香园网友chenlydd认为:

        G418加压后活下来的细胞都是转染成功的。不表达绿色荧光的细胞不代表没有转染成功,该细胞只表达新霉素磷酸转移酶基因,因而对G418产生抗性,只是该细胞不表达目的基因。

        分离只表达目的基因的细胞最好用96孔板用有限稀释法来获得单克隆。细胞培养板在铺细胞前最好先铺一些滋养细胞。滋养细胞来制小鼠腹腔。

        杀死一只小鼠,用70%酒精消毒,然后打开腹腔,用20ml培养基清洗腹腔,然后把腹腔清洗液取出铺板,一只小鼠腹腔清洗液能够铺2-3块96孔板。第二天再铺稳定转染的细胞,一个孔最好铺2-3个细胞。长出单克隆的细胞再扩大转代培养。

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